2 × PCR Super Mix (le dath)
Ann an 2 × PCR Master Mix tha Taq DNA Polymerase, dNTPs, agus co-phàirtean eile a tha riatanach airson PCR.Tha am Master Mix seasmhach airson 3 mìosan aig 4 ℃ leis na stabilizers àbhaisteach againn.Tha am fuasgladh ro-mheasgachaidh air a bharrrachadh airson PCR àbhaisteach agus deiseil airson a chleachdadh le bhith a’ cur teamplaid DNA agus primers ris.Faodar na toraidhean PCR a luchdachadh gu dìreach airson electrophoresis le dath gorm bromophenol ro-luchdaichte.Tha toradh 3 '-dA anns na toraidhean leudaichte agus faodar an clonadh gu furasta ann an vector T.Bidh am Master Mix 2 × PCR a’ sìmpleachadh modh PCR agus a’ lughdachadh truailleadh.
Cumhachan stòraidh
Bu chòir bathar a stòradh aig -25 ℃ ~ -15 ℃ airson 2 bhliadhna.
Sònrachaidhean
| Dìlseachd (vs. Taq) | 1 × |
| Tòisich teth | No |
| Crochadh thairis | 3 '-a |
| Polymerase | Tha DNA polymerase ann |
| Cruth freagairt | SuperMix no Master Mix |
| Astar freagairt | Inbhe |
| Seòrsa Bathar | PCR Master Mix (2x) |
Stiùiridhean
1.Siostam freagairt
| Co-phàirtean | Toirt(μL) |
| DNA teamplaid | Freagarrach |
| Primer 1 (10 μmol/L) | 2 |
| Primer 2 (10 μmol/L) | 2 |
| 2 × PCR Master Mix | 25 |
| dhh2O | gu 50 |
2.Pròtacal leudachaidh
| Ceumannan rothaireachd | Teòthachd (°C) | Uair | Rothaichean |
| Dì-nàdarachadh tùsail | 94 | 5 min | 1 |
| Dì-nàdarachadh | 94 | 30 diog | 35 |
| Annealing | 50-60 | 30 diog | |
| Leudachadh | 72 | 30-60 diog / kb | |
| Leudachadh deireannach | 72 | 10 mion | 1 |
Thoir an aire:
1) Cleachdadh teamplaid: 50-200ng genomic DNA;0.1-10ng DNA plasmid.
2) Mhg2+dùmhlachd: Tha 3mM de MgCl2 anns an toradh seo, a tha freagarrach airson a’ mhòr-chuid de ath-bheachdan PCR.
3) Teòthachd annealing: Feuch an toir thu sùil air luach Tm teòiridheach primers.Faodar an teòthachd annealing a shuidheachadh gu 2-5 ℃ nas ìsle na luach teòiridheach an primer.
4) Ùine leudachaidh: Airson comharrachadh moileciuil, thathas a’ moladh 30 sec / kb.Airson clonadh gine, thathar a 'moladh 60 sec / kb.
Notaichean
1.Chan eil toraidhean PCR le 2 × PCR Master Mix freagarrach airson electrophoresis gel polyacrylamide.
2.Airson do shàbhailteachd is do shlàinte, feuch an cuir thu ort còtaichean obair-lann agus miotagan cuidhteasach airson obrachadh.
3.Tha e air a chleachdadh airson cleachdadh rannsachaidh A-MHÀIN!
