BspQI
Faodar BspQI a chur an cèill gu ath-chuimseach ann an E. coli a dh'aithnicheas làraich sònraichte agus a tha air an dèanamh fo
Tha BspQI, srianadh endonuclease srianadh endonuclease endonuclease, a’ tighinn bho strain E. coli ath-chuingealaichte a bhios a’ giùlan an gen BspQI clonaichte agus atharraichte bho Bacillus sphaericus.Is urrainn dha làraich sònraichte aithneachadh, agus tha sreath aithneachaidh agus làraichean glanaidh mar a leanas:
5' · · · · GCTCTTC(N) · · · · · 3 '
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Feartan toraidh
1. Gnìomh àrd, cnàmhadh luath;
2. Gnìomh rionnag ìosal, a 'dèanamh cinnteach à gearradh ceart mar "scalpel";
3. Às aonais BSA agus saor bho bheathaichean;
Mothachadh Methylation
Dam methylation:Gun Mothachadh;
Dcm methylation:Gun Mothachadh;
Methylation CpG:Gun Mothachadh;
Suidheachadh stòraidh
Bu chòir an toradh a chuir air falbh ≤ 0 ℃;Stòradh aig -25 ~ - 15 ℃ staid.
Bufair stòraidh
20mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA, 500 mM KCl, 1.0 mM dithiothreitol, 500 µg/ml Albumin Recombinant, 0. 1% Trition X- 100 agus 50% glycerol (pH 7.0 @ 25 ° C).
Mìneachadh Aonad
Tha aon aonad air a mhìneachadh mar an ìre de enzyme a dh’ fheumar gus 1µg de DNA smachd a-staigh a chnàmh ann an 1 uair aig 50 ° C ann an tomhas freagairt iomlan de 50 µL.
Smachd Càileachd
Measadh Purity Protein (SDS-PAGE):Bha purrachd BspQI ≥95% air a dhearbhadh le mion-sgrùdadh SDS-PAGE.
RNase:Chan eil 10U de BspQI le 1.6μg MS2 RNA airson 4 uairean aig 50 ℃ a’ toirt a-mach truailleadh sam bith mar a chaidh a dhearbhadh le electrophoresis gel agarose.
Gnìomh DNase neo-shònraichte:Chan eil 10U de BspQI le 1μg λ DNA aig 50 ℃ airson 16 uairean, an coimeas ri 50 ℃ airson 1 uair a thìde, a 'toirt seachad barrachd DNA mar a chaidh a dhearbhadh le electrophoresis gel agarose.
Lùghdachadh agus ath-chuairteachadh:Às deidh cnàmhadh 1 μg λDNA le 10U BspQI, faodar mìrean DNA a cheangal le ligase T4 DNA aig 16ºC.Agus faodar na mìrean ceangailte sin ath-ghearradh le BspQI.
E. coli DNA: Sheall lorgadh TaqMan qPCR E. coli 16s sònraichte rDNA gun robh fuigheall genome E.coli ≤ 0.1pg/ul.
Fuigheall pròtain aoigheachd:≤ 50 ppm
Bataraidh Endotoxin: LAL-deuchainn, a rèir deasachadh Sìneach Pharmacopoeia IV 2020, modh deuchainn crìoch gel, riaghailt choitcheann (1143).Bu chòir susbaint endotoxin bacterial a bhith ≤10 EU / mg.
Siostam freagairt agus suidheachaidhean
| Comh-phàirt | Toirt |
| BspQ I(10 U/μL) | 1 µL |
| DNA | 1 g |
| 10 x BspQ I Bufair | 5 μL |
| dh H2O | Suas gu 50 μL |
Reaction suidheachadh: 50 ℃, 1 ~ 16 h.
Neo-ghnìomhachadh teas: 80 ° C airson 20 mionaid.
Faodaidh an siostam ath-bhualadh agus na cumhaichean buaidh cnàmhaidh enzyme coimeasach math a thoirt seachad, a tha airson fiosrachadh a-mhàin, thoir sùil air na toraidhean deuchainneach airson mion-fhiosrachadh.
Iarrtas toraidh
Cuingealachadh endonuclease bacadh, clonadh luath.
Notaichean
1. Meud an enzyme ≤ 1/10 den tomhas-lìonaidh freagairt.
2. Faodaidh gnìomhachd rionnag tachairt nuair a tha dùmhlachd glycerol nas àirde na 5%.
3. Faodaidh gnìomhachd cleavage tachairt nuair a bhios Substrate nas ìsle na a’ cho-mheas a thathar a’ moladh.
