CHO HCP ELISA Kit
Tha modh ELISA immunosorbent aon-cheum air a chleachdadh anns a’ mheasadh seo.Bidh sampaill anns a bheil CHOK1 HCP ag ath-fhreagairt aig an aon àm le antibody anti-CHOK1 gobhar le bileag HRP agus antibody anti-CHOK1 còmhdaichte air truinnsear ELISA, mu dheireadh a’ cruthachadh iom-fhillte ceapaire de antibody le bileagan antibody-HCP aig ìre cruaidh.Faodar antigen-antibody neo-cheangailte a thoirt air falbh le bhith a’ nighe a’ phlàta ELISA.Tha an substrate TMB air a chur ris an tobar airson freagairt gu leòr.Tha an leasachadh dath air a stad às deidh dha am fuasgladh stad a chuir ris, agus tha luach OD no sùghaidh an fhuasglaidh ath-bhualadh aig 450/650nm air a leughadh le leughadair microplate.Tha an luach OD no an luach sùghaidh a rèir susbaint HCP anns an fhuasgladh.Bhon seo, faodar an dùmhlachd HCP anns an fhuasgladh a thomhas a rèir an lùb àbhaisteach.
Iarrtas
Tha am pasgan seo air a chleachdadh gus faighinn a-mach gu cainneachdail susbaint fuigheall pròtain cealla aoigheachd CHOK1 ann an sampallan.
Cluchd-dùbhlain
| S/N | Comh-phàirt | dùmhlachd | Cumhachan stòraidh |
| 1 | CHOK1 HCP àbhaisteach | 0.5 mg / mL | ≤-20 ℃ |
| 2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0.5 mg / mL | ≤-20 ℃, dìon bho solas |
| 3 | TMB | NA | 2-8 ℃, dìon bho solas |
| 4 | 20 × PBST 0.05 % | NA | 2-8 ℃ |
| 5 | Cuir stad air fuasgladh | NA | RT |
| 6 | Sealadairean microplate | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8 ℃ |
| 8 | Plataichean ro-chòmhdach àrd adsorption | NA | 2-8 ℃ |
Uidheam a dhìth
| Conumables / Uidheam | Dèanamh | Catalog |
| Leughadair microplate | Innealan Molecular | Spectra Max M5, M5e, no a leithid |
| Teirm-mheasgaiche | Eppendorf | Eppendorf/5355, no a leithid |
| Measgadair vortex | IKA | MS3 didseatach, no a leithid |
Stòradh agus seasmhachd
1.Còmhdhail aig -25 ~ -15 ° C.
2.Tha suidheachaidhean stòraidh mar a chithear ann an Clàr 1;tha co-phàirtean 1-2 air an stòradh ≤ - 20 ° C, 5-6 air an stòradh RT, 3 、4 、 7 、 8 air an stòradh aig 2-8 ℃;is e an ùine dligheachd 12 mìosan.
Paramadairean toraidh
1.Cugallachd: 1ng/mL
2.Raon lorgaidh: 3- 100ng / mL
3.Cruinneas: CV taobh a-staigh assay ≤ 10%, CV eadar-mheasadh ≤ 15%
4.Còmhdach HCP:> 80%
5.Sònrachas: Tha am pasgan seo uile-choitcheann leis gu bheil e gu sònraichte ag ath-fhreagairt le CHOK1 HCP neo-eisimeileach bhon phròiseas glanaidh.
Ag ullachadh reactar
1.PBST 0.05%
Gabh 15 ml de 20 × PBST 0.05%, air a lagachadh ann an ddH2O, agus air a dhèanamh suas gu 300 ml.
2.1.0% BSA
Thoir 1g de BSA bhon bhotal agus caolaich ann an 100 ml de PBST 0.05%, measgachadh gu math gus an tèid a sgaoileadh gu tur, agus stòradh aig 2-8 ° C.Tha am bufair caolachaidh ullaichte dligheach airson 7 latha.Thathas a 'moladh ullachadh mar a dh' fheumar.
3.Fuasgladh lorg 2 μg / mL
Gabh 48μL de 0.5 mg / mL Anti-CHO HCP-HRP agus caolaich ann an 11,952μL de 1% BSA gus dùmhlachd deireannach de fhuasgladh lorg 2μg / mL fhaighinn.
4.QC agus Ag ullachadh Inbhean HCP CHOK1
| Tiùb Chan eil. | tùsail | dùmhlachd | Toirt | 1% BSA | Meud iomlan | Deireannach |
| A | Inbhe | 0.5 mg / mL | 10 | 490 | 500 | 10,000 |
| B | A | 10,000 | 50 | 450 | 500 | 1,000 |
| S1 | B | 1,000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Clàr: Ullachadh QC agus Inbhean
Modh-obrach Assay
1.Ullaich na h-ath-bheachdan mar a tha air a chomharrachadh ann an “Reagent Preparation” gu h-àrd.
2.Gabh 50μL de inbhean, sampaill agus QCs (thoir sùil air Clàr 3) a-steach do gach tobar, agus an uairsin cuir 100μL de fhuasgladh lorg (2μg / mL);Còmhdaich truinnsear le sealer, agus cuir an truinnsear ELISA air an thermomixer.Incubate aig 500rpm, 25 ± 3 ℃ airson 2 uair a thìde.
3.Tionndaidh am microplate a-steach don sinc agus cuir às don fhuasgladh còmhdach.Pìob 300μL de PBST 0.05% a-steach do gach tobar gus an truinnsear ELISA a nighe agus am fuasgladh a thilgeil air falbh, agus an nighe a-rithist 3 tursan.Tionndaidh a’ phlàta air tuáille pàipear glan agus tiormaich e.
4.Cuir substrate 100μL deTMB (faic Clàr 1) ri gach tobar, seulaich an truinnsear ELISA, agus goir anns an dorchadas aig 25 ± 3 ℃ airson 15 mion.
5.Pìob 100 μL de fhuasgladh stad a-steach do gach tobar.
6.Tomhais sùghaidh aig tonn-tonn 450/650nm le leughadair microplate.
7.Dèan mion-sgrùdadh air dàta le SoftMax no bathar-bog co-ionann.Dealbhaich lùb àbhaisteach le bhith a’ cleachdadh modal ais-tharraing loidsigeach ceithir-paramadair.
Eisimpleir Curve Coitcheann
NOTA: Ma tha an dùmhlachd de HCP san sampall nas àirde na crìoch àrd an lùb àbhaisteach, feumar a lagachadh gu ceart le bufair caolachaidh mus dèan thu deuchainn.
NOTAICHEAN
Is e am fuasgladh stad searbhag sulfuric 2M, feuch an làimhsich thu gu faiceallach gus nach bi thu a’ frasadh!
