DNA I
Tha DNase I (Deoxyribonuclease I) na endodeoxyribonuclease as urrainn DNA singilte no dà shreath a chnàmh.Bidh e ag aithneachadh agus a’ ceangal bannan phosphodiester gus monodeoxynucleotides no oligodeoxynucleotides le sreathan singilte no dà-fhillte a thoirt gu buil le buidhnean fosfáit aig an 5 ′-terminal agus hydroxyl aig an 3 ′-terminal.Tha gnìomhachd DNase I an urra ri Ca2+ agus faodar a chuir an gnìomh le ions meatailt divalent leithid Mn2+ agus Zn2+.Bidh 5mM Ca2+ a’ dìon an enzyme bho hydrolysis.Ann an làthaireachd Mg2+, dh'fhaodadh an enzyme làrach sam bith aithneachadh agus a ghlanadh air sreath sam bith de DNA.Ann an làthaireachd Mn2+, faodar na sreathan dùbailte de DNA aithneachadh aig an aon àm agus an glanadh aig cha mhòr an aon làrach gus pìosan DNA deireadh rèidh a chruthachadh no mìrean DNA deireadh steigeach le 1-2 nucleotides a’ sruthadh a-mach.
Seilbh Bathar
Pancreas Bovine DNase Chaidh mi a chuir an cèill ann an siostam faireachdainn beirm agus air a ghlanadh.
Cluchd-dùbhlain
| Comh-phàirt | Toirt | |||
| 0.1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I, saor bho RNase | 20 μL | 200 μL | 1 ml | 10mL |
| 10 × DNase I Bufair | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 mL | 5 × 10 mL |
Còmhdhail agus stòradh
1. Stòradh Seasmhachd: - 15 ℃ ~ -25 ℃ airson stòradh;
2.Transport Stability: Còmhdhail fo phasgan deigh;
3. Air a thoirt seachad ann an: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% glycerol, pH 7.6 aig 25 ℃.
Mìneachadh Aonad
Tha aon aonad air a mhìneachadh mar an ìre de einnsein a dhì-mhilleadh gu tur 1 µg de pBR322 DNA ann an 10 mionaidean aig 37 ° C.
Smachd Càileachd
RNase:Chan eil 5U de DNase I le 1.6 μg MS2 RNA airson 4 uairean aig 37 ℃ a ’toirt a-mach truailleadh sam bith mar a chaidh a dhearbhadh le electrophoresis gel agarose.
Bataraidh Endotoxin:LAL-deuchainn, a rèir deasachadh Sìneach Pharmacopoeia IV 2020, modh deuchainn crìoch gel, riaghailt choitcheann (1143).Bu chòir susbaint endotoxin bacterial a bhith ≤10 EU / mg.
Stiùireadh airson a chleachdadh
1.Prepare am fuasgladh ath-bhualadh anns an tiùb gun RNase a rèir nan cuibhreannan a tha air an liostadh gu h-ìosal:
| Comh-phàirt | Toirt |
| RNA | X g |
| 10 × DNase I Bufair | 1 µL |
| DNase I, gun RNase (5U/μL) | 1 U gach μg RNA |
| dhh2O | Suas gu 10 μL |
2.37 ℃ airson 15 mionaidean;
3.Cuir am bufair crìochnachaidh gus stad a chur air an ath-bhualadh, agus teas aig 65 ℃ airson 10 mionaidean gus DNase I a dhì-ghnìomhachadh. Faodar an sampall a chleachdadh gu dìreach airson an ath dheuchainn tar-sgrìobhaidh.
Notaichean
1.Cleachd 1U DNase I gach μg de RNA, no 1U DNase I airson nas lugha na 1μg de RNA.
Bu chòir 2.EDTA a chur ri dùmhlachd deireannach de 5 mM gus RNA a dhìon bho bhith air a thruailleadh nuair a bhios e an sàs ann an enzyme.
