Tòisich blàth Bst 2.0 DNA Polymerase (saor bho glycerol)
Tha Bst DNA polymerase V2 a’ tighinn bho Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I, aig a bheil gnìomhachd DNA polymerase 5 ′ → 3 ′ agus gnìomhachd ath-chuiridh slabhraidh làidir, ach gun ghnìomhachd exonuclease 5 ′ → 3 ′.Tha Bst DNA Polymerase V2 air leth freagarrach airson gluasad dualan, leudachadh isothermal LAMP (leudachadh isothermal le meadhan lùb) agus sreath luath.Is e dreach tòiseachaidh teth a th’ ann am Bst DNA polymerase V2 stèidhichte air Bst DNA polymerase V2 (HC5005A) a gheibhear le teicneòlas atharrachaidh reversible, a dh’ fhaodadh bacadh a chuir air gnìomhachd DNA polymerase aig teòthachd an t-seòmair, gus an urrainnear an siostam ath-bhualadh obrachadh agus a dhealbhadh aig teòthachd an t-seòmair gus casg a chuir air neo-chunbhalachd. - leudachadh sònraichte agus leasachadh èifeachdas ath-bhualadh, agus faodar an dreach seo a lyophilized.A bharrachd air an sin, tha a ghnìomhachd air a leigeil ma sgaoil aig teòthachd àrd, agus mar sin chan eil feum air ceum gnìomhachaidh air leth.
Co-phàirtean
| Comh-phàirt | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst DNA polymerase V2 (Gun glycerol) (8U / μL) | 0.2 mL | 1 ml | 10 ml |
| Bufair 10 × HC Bst V2 | 1.5 mL | 2 × 1.5 mL | 3 × 10 mL |
| MgSO4(100mM) | 1.5 mL | 2 × 1.5 mL | 2 × 10 mL |
Iarrtasan
1.Meudachadh isothermal LAMP
2.Freagairt gluasad singilte sreath DNA
3.Seicheamh gine àrd GC
4.Seicheamh DNA de ìre nanogram.
Suidheachadh stòraidh
Còmhdhail fo 0 ° C agus a bhith air a stòradh aig -25 ° C ~ -15 ° C.
Mìneachadh Aonad
Tha aon aonad air a mhìneachadh mar an ìre de enzyme a tha a’ toirt a-steach 25 nmol de dNTP a-steach do stuth searbhagach do-fhuasgladh ann an 30 mionaid aig 65 ° C.
Smachd Càileachd
1.Measadh Purity Protein (SDS-PAGE):Tha purrachd Bst DNA polymerase V2 ≥99% air a dhearbhadh le mion-sgrùdadh SDS-PAGE a’ cleachdadh lorg Coomassie Blue.
2.EndonucleaseGnìomhachd:Le bhith a’ toirt a-steach freagairt 50 μL anns a bheil co-dhiù 8 U de Bst DNA polymerase V2 le 1 μg λDNA airson 16 uairean aig 37 ℃ chan eil sin a’ ciallachadh gun tèid truailleadh sam bith a lorg mar a chaidh a dhearbhadh.
3.Gnìomh exonuclease:Le bhith a’ toirt a-steach freagairt 50 μL anns a bheil co-dhiù 8 U de Bst DNA polymerase V2 le 1 μg λ -Hind Ⅲ cnàmhadh DNA airson 16 uairean aig 37 ℃ chan eil sin a’ ciallachadh gun lorgar truailleadh sam bith mar a chaidh a dhearbhadh.
4.Gnìomhachd Nickase:Le bhith a’ toirt a-steach freagairt 50 μL anns a bheil co-dhiù 8 U de Bst DNA polymerase V2 le 1 μg pBR322 DNA airson 16 uairean aig 37 ° C chan eil sin a’ ciallachadh gun tèid truailleadh sam bith a lorg mar a chaidh a dhearbhadh.
5.Gnìomhachd RNase:Le bhith a’ toirt a-steach freagairt 50 μL anns a bheil co-dhiù 8 U de Bst DNA polymerase V2 le 1.6 μg MS2 RNA airson 16 uairean aig 37 ° C chan eil sin a’ ciallachadh gun tèid truailleadh sam bith a lorg mar a chaidh a dhearbhadh.
6.E. coliDNA:Tha 120 U de Bst DNA polymerase V2 air a sgrìonadh airson làthaireachd DNA genomic E. coli a’ cleachdadh TaqMan qPCR le primers sònraichte airson an locus rRNA E. coli 16S.Is e an truailleadh DNA genomic E. coli ≤1 Leth-bhreac.
Freagairt LAMP
| Co-phàirtean | 25μL |
| Bufair 10 × HC Bst V2 | 2.5 μL |
| MgSO4 (100mM) | 1.5 μL |
| dNTPs (10mM gach) | 3.5 μL |
| SYTO™ 16 Uaine (25×)a | 1.0 μL |
| Measgachadh primerb | 6 μL |
| Bst DNA Polymerase V2 (Gun glycerol) (8 U / uL) | 1 µL |
| Teamplaid | × μL |
| dhH₂O | Suas gu 25 μL |
Notaichean:
1) a.SYTOTM 16 Uaine (25 ×): A rèir feumalachdan deuchainneach, faodar dathan eile a chleachdadh mar luchd-ionaid;
2) b.Measgachadh primer: air fhaighinn le bhith a’ measgachadh 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2.5 µ M F3, 2.5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB agus leabhraichean eile.
Freagairt agus suidheachadh
Bufair 1 × HC Bst V2, tha an teòthachd brosnachaidh eadar 60 ° C agus 65 ° C.
Neo-ghnìomhachd teas
80 ° C, 20 mionaid
