2 × PCR Master Mix (gun dath)
Tha PCR Master Mix na sheòrsa de fhuasgladh àbhaisteach PCR ro-mheasgaichte a tha deiseil airson a chleachdadh, a’ toirt a-steach Taq DNA Polymerase, measgachadh dNTP MgCl2 agus bufair làn-leasaichte.Rè an ath-bhualadh, chan urrainnear ach an primer agus an teamplaid a chuir ris airson leudachadh, a tha gu mòr a ’sìmpleachadh ceumannan obrachaidh deuchainn.Tha stabilizers sàr-mhath anns an toradh seo agus faodar a stòradh airson 3 mìosan aig 4 ℃.Tha toradh PCR 3 ′-dA a-mach agus faodar a chlò-bhualadh gu furasta ann an vector T.
Cumhachan stòraidh
Bu chòir an toradh a bhith air a stòradh aig -25 ℃ ~ -15 ℃ airson dà bhliadhna.
Sònrachaidhean
| Dìlseachd (vs.Taq) | 1 × |
| Tòisich teth | No |
| Crochadh thairis | 3′-a |
| Polymerase | Tha DNA polymerase ann |
| Cruth freagairt | SuperMix no Master Mix |
| Astar freagairt | Inbhe |
| Seòrsa Bathar | Maighstir measgachadh PCR (2 ×) |
Stiùiridhean
1.Siostam freagairt
| Co-phàirtean | Meud (μL) |
| DNA teamplaid | Freagarrach |
| Primer 1 (10 μmol/L) | 2 |
| Primer 2 (10 μmol/L) | 2 |
| Maighstir measgachadh PCR | 25 |
| dhh2O | Gu 50 |
2.Pròtacal leudachaidh
| Ceumannan rothaireachd | Teòthachd (°C) | Uair | Rothaichean |
| Ro-dhiadhachadh | 94 ℃ | 5 mionaidean | 1 |
| Dì-nàdarachadh | 94 ℃ | 30 diog | 35 |
| Annealing | 50-60 ℃ | 30 diog | |
| Leudachadh | 72 ℃ | 30-60 diogan / kb | |
| Leudachadh Deireannach | 72 ℃ | 10 mionaidean | 1 |
Notaichean:
1) Cleachdadh teamplaid: 50-200 ng genomic DNA;0.1-10 ng DNA plasmid.
2) Mhg2+dùmhlachd: Anns an toradh seo tha 3 mM de MgCl2 a tha freagarrach airson a ’mhòr-chuid de ath-bheachdan PCR.
3) Teòthachd annealing: Feuch an toir thu sùil air luach Tm teòiridheach Primers.Faodar an teòthachd annealing a shuidheachadh gu 2-5 ℃ nas ìsle na luach teòiridheach an primer.
4) Ùine leudachaidh: Airson comharrachadh moileciuil, thathas a’ moladh 30 sec / kb.Airson clonadh gine, 60sec/kb air a mholadh.
Notaichean
1.Airson do shàbhailteachd is do shlàinte, feuch an cuir thu ort còtaichean obair-lann agus miotagan cuidhteasach airson obrachadh.
2.Airson cleachdadh rannsachaidh a-mhàin!
