2 × Rapid Taq Super Mix
Àireamh cat: HCR2016A
Tha 2 × Rapid Taq Super Mix stèidhichte air an Taq DNA Polymerase atharraichte, a’ cur factar leudachaidh làidir, feart àrdachadh leudachaidh agus siostam bufair làn-leasaichte, le èifeachdas leudachaidh fìor àrd.Tha astar leudachaidh teamplaidean iom-fhillte leithid genome taobh a-staigh 3 kb a’ ruighinn 1-3 sec / kb, agus tha astar teamplaidean sìmplidh mar plasmids taobh a-staigh 5 kb a’ ruighinn 1 sec / kb.Faodaidh an toradh seo ùine freagairt PCR a shàbhaladh gu mòr.Aig an aon àm, tha dNTP agus Mg2+ anns a’ mheasgachadh, a ghabhas leudachadh a-mhàin le bhith a’ cur primers agus teamplaidean a-steach, a tha cuideachd gu mòr a’ sìmpleachadh ceumannan obrachaidh an deuchainn.A bharrachd air an sin, tha measgachadh a ’toirt a-steach dath comharran electrophoretic, a dh’ fhaodas a bhith dìreach electrophoresis às deidh an ath-bhualadh.Bidh an àidseant dìon san toradh seo a’ toirt air a ’mheasgachadh gnìomhachd seasmhach a chumail às deidh reothadh is leaghadh a-rithist.Faodar am bann 3'-deireadh A den toradh PCR a chlò-bhualadh gu furasta anns an vectar T.
Co-phàirtean
2 × Rapid Taq Super Mix
Cumhachan stòraidh
Bu chòir toraidhean PCR Master Mix a stòradh aig -25 ~ -15 ℃ airson 2 bhliadhna.
Sònrachaidhean
| Sònrachadh toraidh | Rapid Taq Super Mix |
| dùmhlachd | 2 × |
| Tòisich teth | Toiseach tòiseachaidh teth togte |
| Crochadh thairis | 3′-a |
| Astar freagairt | Gu luath |
| Meud (Bathar Deireannach) | Suas gu 15 kb |
| Riatanasan airson còmhdhail | Deigh thioram |
Stiùiridhean
1. Siostam Reaction (50 μL)
| Co-phàirtean | Meud (μL) |
| Teamplaid DNA* | freagarrach |
| Thoir air adhart primer (10 μmol/L) | 2.5 |
| Reverse primer (10 μmol/L） | 2.5 |
| 2 × Rapid Taq Super Mix | 25 |
| dhh2o | gu 50 |
2.Pròtacal leudachaidh
| Ceumannan rothaireachd | Teòthachd (°C) | Uair | Rothaichean |
| Predenaturation | 94 | 3 min | 1 |
| Dì-nàdarachadh | 94 | 10 diog |
28-35 |
| Annealing | 60 | 20 diog | |
| Leudachadh | 72 | 1-10 diog/kb |
Cleachdadh teamplaidean eadar-dhealaichte air a mholadh:
| Seòrsa teamplaid | Raon cleachdadh earrann (siostam freagairt 50 μL) |
| DNA genomic no E. coli leaghan | 10-1,000 ng |
| DNA plasma no viral | 0,5-50 ng |
| cDNA | 1-5 µL (gun a bhith nas fhaide na 1/10 de mheud iomlan an fhreagairt PCR) |
| Thathas a’ moladh cleachdadh diofar theamplaidean | |
Notaichean:
1.Cleachdadh reactant: làn leaghadh agus measgachadh mus tèid a chleachdadh.
2. Teòthachd annealing: Is e an teòthachd annealing an luach Tm uile-choitcheann, agus faodar cuideachd a shuidheachadh 1-2 ℃ nas ìsle na an luach Tm primer.
3. Astar leudachaidh: Suidhich 1 sec/kb airson teamplaidean iom-fhillte leithid genome agus E. coli taobh a-staigh 1 kb;suidhich 3 sec/kb airson teamplaidean iom-fhillte leithid genome 1-3 kb agus E. coli;suidhich 10 sec/kb airson teamplaidean iom-fhillte thairis air genome 3 kb agus E. coli.Faodaidh tu an luach a shuidheachadh gu 1 sec / kb airson teamplaid sìmplidh leithid plasmid nas lugha na 5 kb, 5 diog / kb airson teamplaid sìmplidh leithid plasmid eadar 5 agus 10 kb, agus 10 diog / kb airson teamplaid sìmplidh leithid plasmid nas motha na 10 kb.
Notaichean
1. Airson do shàbhailteachd agus do shlàinte, feuch an cuir thu ort còtaichean obair-lann agus miotagan cuidhteasach airson obrachadh.
2. Tha an toradh seo airson cleachdadh rannsachaidh A-MHÀIN!
