Rnase A
Tha Ribonuclease A (RNaseA) na polypeptide aon-shreath anns a bheil 4 bannan disulfide le cuideam moileciuil timcheall air 13.7 kDa.Tha RNase A na endoribonuclease a tha gu sònraichte a’ lughdachadh RNA aon-shreath aig fuigheall C agus U.Gu sònraichte, tha an cleavage ag aithneachadh a’ cheangail phosphodiester a chaidh a chruthachadh leis a’ bhuidheann 5 ′-ribose de nucleotide agus a’ bhuidheann fosfáit air an 3 ′-ribose den nucleotide pyrimidine a tha faisg air làimh, gus am bi na 2, 3′-Cyclic phosphates air an uisgeachadh gu na 3 co-fhreagarrach. ′nucleoside phosphates (me pG-pG-pC-pA-pG air a ghlanadh le RNase A gus pG-pG-pCp agus A-PG a ghineadh).Is e RNase A an fheadhainn as gnìomhaiche ann a bhith a’ glanadh RNA aon-shreath.Is e an dùmhlachd obrach a thathar a’ moladh 1-100 μG / mL, co-chosmhail ri diofar shiostaman freagairt.Faodar dùmhlachd salainn ìosal (0-100 mM NaCl) a chleachdadh gus RNA aon-shreath, RNA dà-shreath, agus slabhraidhean RNA a chaidh a chruthachadh le tar-chur RNA-DNA a ghearradh.Ach, aig ìre àrd salainn (≥0.3 M), chan eil RNase A ach gu sònraichte a’ glanadh RNA aon-shreath.
Tha RNase A air a chleachdadh gu cumanta airson RNA a thoirt air falbh nuair a thathar ag ullachadh DNA plasmid no DNA genomic.Faodar an dòigh thraidiseanta air goil ann an amar uisge a chleachdadh gus gnìomhachd DNase a chuir an gnìomh.Chan eil DNase agus protease anns an toradh seo, agus chan fheum e làimhseachadh teas mus tèid a chleachdadh.A bharrachd air an sin, faodar an toradh seo a chleachdadh cuideachd ann an deuchainnean bith-eòlas moileciuil leithid mion-sgrùdadh dìon RNase agus mion-sgrùdadh sreath RNA.
Cumhachan stòraidh
Faodar an toradh a stòradh aig -25 ～-15 ℃, dligheach airson 2 bhliadhna.
Stiùiridhean
Is e seo aon de na dòighean cumanta airson fuasgladh stòraidh RNase A ullachadh.Faodaidh e cuideachd a bhith air ullachadh ledòighean eile a rèir modhan traidiseanta san obair-lann no litreachas iomraidh (leithida’ sgaoileadh gu dìreach ann am fuasgladh 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 no Tris-NaCl)
1. Cleachd sodium acetate 10 mM (pH 5.2) gus 10 mg/mL de fhuasgladh stòraidh RNase A ullachadh
2. Teasachadh aig 100 ℃ airson 15 min
3. Cool gu teòthachd an t-seòmair, cuir 1/10 tomhas-lìonaidh 1 M Tris-HCl (pH 7.4), atharraich am pH aige gu 7.4 (airsoneisimpleir, cuir 500 ml de fhuasgladh stòraidh RNase 10g/ml 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. Fo-phacaichte aig -20 ℃ airson stòradh reòta, a dh'fhaodas a bhith seasmhach airson suas ri 2 bhliadhna.
[Notaichean]: Nuair a bhios tu a’ goil fuasgladh RNAseA fo chumhachan neodrach, cruthaichidh frasadh RNase;Boil e aig pH nas ìsle, agus ma tha sileadh ann, faodar a choimhead, a dh ’fhaodadh a bhith air adhbhrachadh le làthaireachd neo-chunbhalachd pròtain.Ma lorgar grùid às deidh a bhith a’ goil, faodar neo-chunbhalachd a thoirt air falbh le centrifugation aig astar àrd (13000rpm), agus an uairsin fo-phaca airson stòradh reothadh.
Fiosrachadh toraidh
| Co-fhaclan | Ribonuclease I;ribonuclease pancreatic;Ribonuclease 3'-pyrimidnooligonucleotidohydrolase;Rnase A;Endoribonulceas I |
| CAS Àir. | 9001-99-4 |
| Coltas | Pùdar geal lyophilized |
| Molecular cuideam | ~ 13.7kDa (sreath aminoideach) |
| Luach Ph | 7.6 (raon gnìomhachd 6-10) |
| Teòthachd iomchaidh | 60 ℃ (Raon gnìomhachd 15-70 ℃) |
| Àidseant gnìomhachaidh | Na2+.K+ |
| Neach-bacadh | Rnase Inhibitor |
| Modh neo-ghnìomhachd | Chan urrainnear a chuir an gnìomh le teasachadh, thathas a’ moladh colbh centrifuge a chleachdadh |
| Tùs | crodh |
| Fuasgladh | Soluble ann an uisge (10mg/ml) |
| Call air tioram | ≤5.0% |
| Gnìomh enzyme | ≥60 aonad Kunitz / mg |
| Puing isoelectric | 9.6 |
Notaichean
Airson do shàbhailteachd is do shlàinte, feuch an cuir thu ort còtaichean obair-lann agus miotagan cuidhteasach airson obrachadh.
