5 × Neoscript Fast RT-qPCR Premix plus-UNG

Àireamh Cat: HCB5142A

Tha Neoscript Fast RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) na mheasgachadh stèidhichte air probe aon-tiùb air leth seasmhach a tha freagarrach airson tar-sgrìobhadh cùl aon-cheum agus PCR cainneachdail (qRT-PCR).Bidh e a’ toirt taic do ro-mheasgadh primers agus probes agus fuirich seasmhach às deidh stòradh ùine mhòr aig teòthachd ìosal.Faodar an sampall a thèid a dhearbhadh a chuir ris gu dìreach nuair a thathar ga chleachdadh, às aonais fosgladh tiùba / obair pìobaireachd a bharrachd.Tha an toradh seo a’ toirt seachad co-phàirtean, me DNA polymerase teas-tòiseachaidh, M-MLV, uracil teas-labile DNA glycosylase (TS-UNG), RNase Inhibitor, MgCl₂, dNTPs (le dUTP an àite dTTP), agus stabilizers.Leis an transcriptase reverse leudachaidh luath a chaidh atharrachadh gu ginteil agus DNA polymerase, tha e comasach an leudachadh PCR a chrìochnachadh taobh a-staigh mionaidean 20-40.Bidh an reagent seo a’ cleachdadh bufair sònraichte airson qPCR le enzyman measgaichte de enzym leudachaidh an-aghaidh casg agus enzyme UNG.Mar sin, faodaidh e leudachadh math fhaighinn air ginean targaid agus casg a chuir air leudachadh meallta air adhbhrachadh le truailleadh PCR fuigheall agus aerosol.Tha an reagent seo co-chòrdail ris a’ mhòr-chuid de dh’ ionnstramaidean cainneachdail PCR bho luchd-saothrachaidh leithid Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad agus Roche.

Comh-phàirt

1.25 × Neoscript Fast RTase / UNG Mix

2.5 × Bufair Premix Fast Neoscript RT (dUTP)

Cumhachan stòraidh

Bu chòir na pàirtean uile a chumail aig -20 ℃ airson stòradh fad-ùine agus 4 ℃ airson suas ri 3 mìosan.Feuch an measgachadh thu gu mionaideach às deidh leaghadh agus centrifuge mus cleachd thu.Seachain reothadh tric.

Ullachadh siostam freagairt qRT-PCR

1) a.The deireannach dùmhlachd de primer mar as trice 0.2μM.Airson toraidhean nas fheàrr, faodar an dùmhlachd primer a mheudachadh taobh a-staigh raon 0.2-1μM.San fharsaingeachd, faodar an dùmhlachd probe a mheudachadh taobh a-staigh raon 0.1-0.3μM.

2) b. Nuair a bhios tu a’ cleachdadh modh-obrach luath PCR, dh’ fhaodadh àrdachadh ann an dùmhlachd de primers agus probes leantainn gu toraidhean leudachaidh nas fheàrr, agus bu chòir an co-mheas aca a mheudachadh a rèir sin.

3) Tha diofar sheòrsaichean de shamhlaichean a’ toirt a-steach diofar sheòrsaichean agus susbaint inhibitor agus leth-bhreac àireamh de ghine targaid.Bu chòir beachdachadh air meud an t-sampall a rèir an fhìor staid.Dèan lagachadh den sampall le uisge gun nuclease no TE Buffer, ma tha sin riatanach.

Freagairt Crùintean

Smachd Càileachd

1.Lorg gnìomh: cugallachd, sònrachas agus ath-aithris qPCR.

2.Gun ghnìomhachd nuclease exogenous: gun truailleadh endonuclease exogenous agus exonuclease.

Notaichean

1.Chan eil ìre leudachaidh DNA polymerase luath nas ìsle na 1kb / 10s.Tha astaran teasachaidh is fuarachaidh eadar-dhealaichte aig diofar ionnstramaidean PCR, modhan smachd teothachd agus giùlan teirmeach, agus mar sin tha e deatamach gum bi an dòigh cruinneachaidh agus ruith primer / probe agad còmhla ris an ionnstramaid PCR luath sònraichte agad.

2.Bidh an toradh seo a’ coileanadh iomchaidheachd farsaing, agus tha e freagarrach airson breithneachadh moileciuil le mothachadh àrd.Tha modh PCR trì-cheum air a mholadh airson primers le teòthachd ìosal analing no airson leudachadh air pìosan fada os cionn 200 bp.

3.Leis gu bheil èifeachdas cleachdaidh eadar-dhealaichte aig dUTP aig diofar amplicons agus cugallachd eadar-dhealaichte ri UNG, bu chòir na h-ath-bheachdan a mheudachadh ma lùghdaicheas an cugallachd lorg nuair a bhios iad a’ cleachdadh siostam UNG.Feuch an cuir thu fios thugainn airson taic theicnigeach ma tha feum air.

4.Gus leudachadh air toraidhean PCR a sheachnadh, tha feum air raon deuchainneach sònraichte agus pìobaire airson leudachadh.Obraich le miotagan agus atharraich gu tric agus na fosgail an tiùb PCR às deidh leudachadh.