Rnase Inhibitor (saor bho glycerol)
Tha neach-dìon Murine RNase na neach-dìon murine RNase ath-leasaichte air a chuir an cèill agus air a ghlanadh bho E.coli.Bidh e a’ ceangal ri RNase A, B no C ann an co-mheas 1: 1 tro cheangal neo-covalent, mar sin a’ cur bacadh air gnìomhachd nan trì enzyman agus a’ dìon RNA bho chrìonadh.Ach, chan eil e èifeachdach an aghaidh RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H no RNase bho Aspergillus.Chaidh neach-dìon Murine RNase a dhearbhadh le RT-PCR, RT-qPCR agus IVT mRNA, agus bha e co-chòrdail ri diofar transcriptases malairteach Reverse, DNA polymerases agus RNA polymerases.
An coimeas ri luchd-dìon RNase daonna, chan eil dà cysteine ann an neach-dìon murine RNase a tha gu math mothachail air oxidation a dh ’adhbhraicheas neo-ghnìomhachd an neach-dìon.Tha sin ga dhèanamh seasmhach aig dùmhlachd ìosal de DTT (nas lugha na 1 mM).Tha am feart seo ga dhèanamh freagarrach airson a chleachdadh ann an ath-bheachdan far a bheil dùmhlachd àrd de DTT a ’toirt droch bhuaidh air an ath-bhualadh (me Real-time RT-PCR).
Atagradh
Faodar an toradh seo a chleachdadh gu farsaing ann an deuchainn sam bith far a bheil e comasach bacadh RNase a sheachnadh gus truailleadh RNA a sheachnadh, leithid:
1.First-strand cDNA synthesis, RT-PCR, RT-qPCR, msaa;
2.Dìon RNA bho chrìonadh ann an tar-sgrìobhadh/eadar-theangachadh in-vitro (me mac-samhail viral in vitro);
3.Inhibition de ghnìomhachd RNase rè iomallachd RNA agus purchadh.
Cumhachan stòraidh
Stòradh aig -25～-15 ℃;
Cearcallan reothadh-leaghadh ≤ 5 tursan;
Dligheach airson 1 bliadhna.
Mìneachadh aonad
Tha aon aonad air a mhìneachadh mar an ìre de RNase Inhibitor a dh’ fheumar gus casg a chuir air gnìomhachd 5 ng de RNase A le 50%.
Molecular cuideam
Tha RNase Inhibitor (gun glycerol) na phròtain 50 kDa.
Smachd càileachd
Exonuclease Gnìomh:
Mar thoradh air a bhith a’ toirt a-steach 40 U de enzyme le 1 μg λ-Hind III cnàmhadh DNA airson 16 uairean aig 37 ° C cha deach truailleadh sam bith a lorg air an DNA mar a chaidh a dhearbhadh le gel electrophoresis.
Gnìomh endonuclease:
Mar thoradh air a bhith a’ toirt a-steach 40 U de enzyme le 1 μg λ DNA airson 16 uairean aig 37 ° C cha robh truailleadh sam bith air an DNA mar a chaidh a dhearbhadh le electrophoresis gel.
A' gnogadh Gnìomh:
Mar thoradh air goir 40 U de enzyme le 1 μg pBR322 airson 16 uairean aig 37 ℃ cha robh truailleadh sam bith air an DNA mar a chaidh a dhearbhadh le electrophoresis gel.
RNase Gnìomhachd:
Mar thoradh air a bhith a’ toirt a-steach 40 U de enzyme le 1.6 μg MS2 RNA airson 4 uairean aig 37 ℃ cha robh truailleadh sam bith air an RNA mar a chaidh a dhearbhadh le electrophoresis gel.
E.DNA coli:
Tha TaqMan qPCR a’ lorg 40 U de einnim.Is e an DNA E.coli ≤ 0. 1pg/40U.
Niths
1. Na bi a’ crathadh no a’ gluasad gu brùideil gus casg a chuir air gnìomhachd enzyme.
Tha 2.RNase inhibitor gnìomhach aig teòthachd bho 25 ℃ gu 55 ℃ agus tha e neo-ghnìomhach aig ≥65 ℃.
3.Chan eil bacadh air gnìomhachd RNase H, RNase 1, agus RNase T1.
4.Tha an raon pH airson casg a chuir air gnìomhachd RNase farsaing (gnìomhach aig pH 5-9), a’ taisbeanadh gnìomhachd as àirde aig pH 7-8.
