Proteinase K NGS (pùdar)
Àireamh cat: HC4507A
Is e protease serine seasmhach a th’ ann an NGS Protease K le gnìomhachd enzyme àrd agus sònrachas substrate farsaing.Mar sin, bidh e air a chleachdadh gu tric airson pròtainean a lughdachadh gu peptides goirid.Tha NGS Protease K na protease serine àbhaisteach leis an Asp39-Tha aige69-Sear224triad catalytic a tha gun samhail dha proteases serine, agus tha an ionad catalytic air a chuairteachadh le tow Ca2+làraich ceangail airson seasmhachd, cumail suas gnìomhachd àrd enzyme fo raon nas fharsainge de shuidheachaidhean.
Sònrachadh
| Coltas | Pùdar amorphous geal gu geal, lyophilized |
| Gnìomh sònraichte | ≥40U/mg cruaidh |
| DNA | Cha deach gin a lorg |
| RNase | Cha deach gin a lorg |
| Bith-eallach | ≤50CFU/g cruaidh |
| Fuigheall searbhag niuclasach | <5pg/mg cruaidh |
Feartan
| Stòr | Clàr tritirachium saor an asgaidh |
| EC àireamh | 3.4.21.64(Ath-mheasgadh bhon chlàr Tritirachium) |
| Molecular cuideam | 29kDa (SDS-DUILLEAG) |
| Puing isoelectric | 7.81 Fig.1 |
| pH as fheàrr | 7.0-12.0 (Bidh iad uile a’ coileanadh gnìomhachd àrd) Fig.2 |
| An teòthachd as fheàrr | 65 ℃ Fig.3 |
| Seasmhachd pH | pH 4.5-12.5 (25 ℃, 16h) Fig.4 |
| Seasmhachd teirmeach | Fo 50 ℃ (pH 8.0, 30min) Fig.5 |
| Seasmhachd stòraidh | Air a stòradh aig 25 ℃ airson 12 mìosan Fig.6 |
| Gnìomhaichean | SDS, urea |
| Luchd-bacadh | Diisopropyl fluorophosphate;fluoride benzylsulfonyl |
Cumhachan stòraidh
Stòradh am pùdar lyophilized aig -25 ~ -15 ℃ airson ùine fhada air falbh bho sholas;Às deidh an sgaoileadh, cuir a-steach an tomhas iomchaidh airson stòradh geàrr-ùine aig 2-8 ℃ air falbh bho stòradh aotrom no fad-ùine aig -25 ~ -15 ℃ air falbh bho sholas.
Earalasan
Cleachd miotagan dìon agus goggles nuair a bhios tu a’ cleachdadh no a’ tomhas cuideam, agus cùm deagh fhionnarachadh às deidh a chleachdadh.Dh’ fhaodadh an toradh seo ath-bhualadh mothachaidh craiceann adhbhrachadh agus irioslachd mòr sùla.Ma thèid anail a-steach, faodaidh e comharraidhean aileirdsidh no asthma no dyspnea adhbhrachadh.Dh’ fhaodadh irioslachd analach adhbhrachadh.
Mìneachadh aonad
Tha aon aonad de NGS Protease K air a mhìneachadh mar an ìre de enzyme a dh’ fheumar gus casein a hydrolyze a-steach gu 1 μmol L-tyrosine fo chumhachan dearbhaidh àbhaisteach.
Ag ullachadh reactaran
| Ath-ghnìomhaiche | Dèanadair | Catalog |
| Teicnigeach Caseinbho bhainne buaile | Sigma Aldrich | C7078 |
| NaOH | Sinopharm ceimigeachReagent Co., Earr. | 10019762 |
| NaH2PO4·2h2O | Sinopharm ceimigeachReagent Co., Earr. | 20040718 |
| Na 2HPO4 | Sinopharm ceimigeachReagent Co., Earr. | 20040618 |
| Acad trichloroacetic | Sinopharm ceimigeachReagent Co., Earr. | 80132618 |
| Acetate sodium | Sinopharm ceimigeachReagent Co., Earr. | 10018818 |
| Acetic acid | Sinopharm ceimigeachReagent Co., Earr. | 10000218 |
| HCl | Sinopharm ceimigeachReagent Co., Earr. | 10011018 |
| Sòidiam carbonate | Sinopharm ceimigeachReagent Co., Earr. | 10019260 |
| Foline-phenol | Sangon Biotech (Shanghai)Co., Earr. | A500467-0100 |
| L-tyrosine | Sigma | 93829 |
Reagent I:
Fo-strat: 1% Casein bho fhuasgladh bainne bò: sgaoil 1g cùisin bainne bò ann an 50ml de fhuasgladh sodium phosphate 0.1M, pH 8.0, teas ann an amar uisge aig 65-70 ° C airson 15 mionaidean, stir agus sgaoil, fionnar le uisge, air atharrachadh le sodium hydroxide gu pH 8.0, agus caolaich a-steach gu 100ml.
Reagent II:
Fuasgladh TCA: searbhag trichloroacetic 0.1M, acetate sodium 0.2M agus searbhag acetic 0.3M (cuideam 1.64g searbhag trichloroacetic + 1.64g sodium acetate + 1.724mL searbhag acetic às deidh a chèile, cuir 50mL deionized uisge, atharraich le HCl gu pH 4. 100ml).
Imoibrí III:
Fuasgladh sodium carbonate 0.4m (cuideam 4.24g sodium carbonate anhydrous agus sgaoil ann an uisge 100mL)
Reagent IV:
Folin phenol reagent: caolaich 5 tursan le uisge deionized.
Reagent V:
Enzyme diluent: 0.1 M fuasgladh sodium phosphate, pH 8.0.
Reagent VI:
Fuasgladh àbhaisteach L-tyrosine: 0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol / ml L-tyrosine air a sgaoileadh le 0.2M HCl.
Modh-obrach
1. Tionndaidh air an UV-Vis spectrophotometer agus tagh photometric tomhas.
2. Suidhich an tonn-tonn mar 660nm.
3. Tionndaidh air an amar uisge, cuir an teòthachd gu 37 ℃, dèan cinnteach nach atharraich an teòthachd airson 3-5m.
4. Preheat substrate 0.5mL ann an tiùb centrifuge 2mL aig amar uisge 37 ℃ airson 10 mionaidean.
5. Thoir a-mach fuasgladh enzyme caolaichte 0.5mL a-steach don tiùb centrifuge preheated airson 10 mionaidean.Suidhich enzyme diluent mar bhuidheann falamh.
6. Cuir 1.0 mL TCA reactant dìreach an dèidh an reaction.Meudaich gu math agus cuir a-steach ann an amar uisge airson 30 mionaid.
7. Centrifugate reaction fuasgladh.
8. Cuir na co-phàirtean a leanas san òrdugh a chaidh a shònrachadh.
| Ath-ghnìomhaiche | Toirt |
| Supernatant | 0.5 mL |
| 0.4M sodium carbonate | 2.5 mL |
| Folin phenol reactar | 0.5 mL |
9. Measgaich gu math mus cuir thu a-steach ann an amar uisge 37 ℃ airson 30 mionaid.
10. OD660air a dhearbhadh mar OD1;buidheann smachd bàn: Bithear a’ cleachdadh dinnsear einnsein gus fuasgladh enzyme a chuir an àite gus OD a dhearbhadh660mar OD2, OD = OD1-OD2.
11. L-tyrosine lùb àbhaisteach: 0.5mL dùmhlachd eadar-dhealaichte L-tyrosine fuasgladh, 2.5mL 0.4M Sòidiam carbonate, 0.5mL Folin phenol reagent ann 5mL centrifuge tube, goir ann an 37 ℃ airson 30 mionaid, lorg airson OD660airson dùmhlachd eadar-dhealaichte de L-tyrosine, fhuair e an lùb àbhaisteach Y = kX + b, far a bheil Y an dùmhlachd L-tyrosine, is e X OD600.
Àireamhachadh
2: Meud iomlan de fhuasgladh freagairt (mL)
0.5: Meud fuasgladh enzyme (mL)
0.5: Meud lionn freagairt air a chleachdadh ann an dearbhadh chromogenic (mL)
10: Ùine freagairt (mion)
Df: caolachadh iomadaidh
C: dùmhlachd enzyme (mg/mL)
Figearan
Fig.1 DNA air fhàgail
| Sampall | Abh C4 | Acid niuclasach Ath-bheothachadh (pg/mg) | Ath-bheothachadh (%) | Niùclasach iomlan searbhag ( pg/mg) |
| PRK | 24.66 | 2.23 | 83% | 2.687 |
| PRK+STD2 | 18.723 | 126.728 | - | - |
| STD1 | 12.955 |
- |
- |
- |
| STD2 | 16 | |||
| STD3 | 19.125 | |||
| STD4 | 23.135 | |||
| STD5 | 26.625 | |||
| H2O saor bho RNA | Neo-chinnteach | - | - | - |
Fig.2 pH as fheàrr
Fig.3 An teòthachd as fheàrr
Fig.4 pH Seasmhachd
Fig.5 Seasmhachd teirmeach
Fig.6 Seasmhachd stòraidh aig 25 ℃
