Rnase A
Tha Ribonuclease A (RNAseA) na polypeptide aon-shreath anns a bheil 4 bannan disulfide le cuideam moileciuil timcheall air 13.7 kDa.Tha RNase Ais na endoribonuclease a tha gu sònraichte a’ lughdachadh RNA aon-shreath aig fuigheall C agus U.Gu sònraichte, tha an cleavage ag aithneachadh a’ cheangail phosphodiester a chaidh a chruthachadh leis an 5’-ribose de nucleotide agus a’ bhuidheann fosfáit air an 3’-ribose den nucleotide pyrimidine a tha faisg air làimh, gus am bi na 2,3’-Cyclic phosphates air an hydrolyzed chun an 3 co-fhreagarrach. Tha phosphates nucleoside (me, pG-pG-pC-pA-pG air a ghlanadh le RNase A gus pG-pG-pCp agus A-PG a ghineadh).Is e RNase A an fheadhainn as gnìomhaiche ann a bhith a’ glanadh RNA aon-shreath.Is e an dùmhlachd obrach a thathar a’ moladh 1-100 μ G / mL, co-chosmhail ri diofar shiostaman freagairt.Faodar dùmhlachd salainn ìosal (0-100 mM NaCl) a chleachdadh gus RNA aon-shreath, RNA dà-shreath, agus slabhraidhean RNA a chaidh a chruthachadh le tar-chur RNA-DNA a ghearradh.
Ach, aig ìre àrd salainn (≥0.3 M), chan eil RNase A ach gu sònraichte a’ glanadh RNA aon-shreath.
Tha RNase A air a chleachdadh gu cumanta airson RNA a thoirt air falbh nuair a thathar ag ullachadh DNA plasmid no DNA genomic.Faodaidh co-dhiù a tha DNase gnìomhach no nach eil tron phròiseas ullachaidh buaidh a thoirt air an ath-bhualadh.Faodar an dòigh thraidiseanta air goil ann an amar uisge a chleachdadh gus gnìomhachd DNase a chuir an gnìomh.Chan eil DNase agus protease anns an toradh seo, agus chan fheum e làimhseachadh teas mus tèid a chleachdadh.A bharrachd air an sin, faodar an toradh seo a chleachdadh cuideachd ann an deuchainnean bith-eòlas moileciuil leithid mion-sgrùdadh dìon RNase agus mion-sgrùdadh sreath RNA.
Suidheachadh stòraidh
Bu chòir an toradh a bhith air a stòradh aig -25 ℃ ~ - 15 ℃ airson 2 bhliadhna.
Sònrachaidhean
| Coltas | Pùdar |
| Meud | 100mg / 1g |
| Seòrsa toraidh | RNase A |
Stiùiridhean
Is e seo aon de na dòighean cumanta airson fuasgladh stòraidh RNase A ullachadh.Faodaidh e cuideachd a bhith air ullachadhle dòighean eile a rèir dhòighean traidiseanta san obair-lann no litreachas iomraidh (leithida’ sgaoileadh gu dìreach ann am fuasgladh 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 no Tris-NaCl)
1. Cleachd sodium acetate 10 mM (pH 5.2) gus 10 mg/mL de fhuasgladh stòraidh RNase A ullachadh.
2. Teasachadh aig 100 ℃ airson 15 min.
3. Cool gu teòthachd an t-seòmair, cuir 1/10 tomhas-lìonaidh de 1 M Tris-HCl (pH 7.4), atharraich am pH aige gu 7.4 (airsonMar eisimpleir, cuir 500 mL de fhuasgladh stòraidh RNase 10 mg / mL 1 M Tris-HCl, pH7.4).
4. Fo-phaca aig -20 ℃ airson stòradh reòta, a dh'fhaodas a bhith seasmhach airson suas ri 2 bhliadhna.
[Notaichean]:
Nuair a bhios tu a’ goil fuasgladh RNAseA fo chumhachan neodrach, cruthaichidh frasadh RNase;Boil e aig pH nas ìsle, agus ma tha sileadh ann, faodar a choimhead, a dh ’fhaodadh a bhith air adhbhrachadh le làthaireachd neo-chunbhalachd pròtain.Ma lorgar grùid às deidh a ghoil, faodar neo-chunbhalachd a thoirt air falbh le centrifugation aig astar àrd (13000rpm), agus an uairsin fo-phaca airson stòradh reothadh.
Notaichean
Feuch an caith thu am PPE riatanach, a leithid de chòta obair-lann agus miotagan, gus do shlàinte is do shàbhailteachd a dhèanamh cinnteach.
