Rnase Inhibitor
Tha neach-dìon Murine RNase na neach-dìon murine RNase ath-leasaichte air a chuir an cèill agus air a ghlanadh bho E.coli.Bidh e a’ ceangal ri RNase A, B no C ann an co-mheas 1: 1 tro cheangal neo-covalent, mar sin a’ cur bacadh air gnìomhachd nan trì enzyman agus a’ dìon RNA bho chrìonadh.Ach, chan eil e èifeachdach an aghaidh RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H no RNase bho Aspergillus.Chaidh neach-dìon Murine RNase a dhearbhadh le RT-PCR, RT-qPCR agus IVT mRNA, agus bha e co-chòrdail ri diofar transcriptases malairteach Reverse, DNA polymerases agus RNA polymerases.
An coimeas ri luchd-dìon RNase daonna, chan eil dà cysteine ann an neach-dìon murine RNase a tha gu math mothachail air oxidation a dh ’adhbhraicheas neo-ghnìomhachd an neach-dìon.Tha sin ga dhèanamh seasmhach aig dùmhlachd ìosal de DTT (nas lugha na 1 mM).Tha am feart seo ga dhèanamh freagarrach airson a chleachdadh ann an ath-bheachdan far a bheil dùmhlachd àrd de DTT a ’toirt droch bhuaidh air an ath-bhualadh (me Real-time RT-PCR).
Atagradh
Faodar an toradh seo a chleachdadh gu farsaing ann an deuchainn sam bith far a bheil e comasach bacadh RNase a sheachnadh gus truailleadh RNA a sheachnadh, leithid:
1.Synthesis den chiad shreath de cDNA, RT-PCR, RT-qPCR, msaa.
2.A’ dìon RNA bho chrìonadh rè tar-sgrìobhadh/eadar-theangachadh in vitro (me, siostam mac-samhail bhìorasach in vitro).
3.A 'bacadh gnìomhachd RNase rè dealachadh agus glanadh RNA.
Cumhachan stòraidh
Faodar an toradh a stòradh aig -25 ～- 15 ℃, dligheach airson 2 bhliadhna.
Bufair stòraidh
50 mM KCl, 20 mM HEPES-KOH (pH 7.6, 25 ℃), 8 mM DTT agus 50% glycerol.
Mìneachadh aonad
Chaidh an ìre de neach-dìon murine RNase a dh ’fheumar gus casg a chuir air gnìomhachd 5ng de ribonuclease A le 50% a mhìneachadh mar aon aonad (U).
Molecular cuideam pròtain
Is e an cuideam moileciuil de neach-dìon murine RNase 50 kDa.
Smachd càileachd
Exonuclease Gnìomh:
Chan eil 40 U de neach-dìon murine RNase le 1 μg λ -Hind III cnàmhadh DNA aig 37 ℃ airson 16 uairean a ’toirt a-mach truailleadh sam bith mar a chaidh a dhearbhadh le electrophoresis gel agarose.
Gnìomh endonuclease:
Chan eil 40 U de neach-dìon murine RNase le 1μ g λ DNA aig 37 ℃ airson 16 uairean a ’toirt a-mach truailleadh sam bith mar a chaidh a dhearbhadh le electrophoresis gel agarose.
A' gnogadh Gnìomh:
Chan eil 40U de neach-dìon murine RNase le 1μ g pBR322 aig 37 ℃ airson 16 uairean a ’toirt a-mach truailleadh sam bith mar a chaidh a dhearbhadh le electrophoresis gel agarose.
RNase Gnìomhachd:
Chan eil 40U de neach-dìon murine RNase le 1.6μ g MS2 RNA airson 4h aig 37 ℃ a ’toirt a-mach truailleadh sam bith mar a chaidh a dhearbhadh le electrophoresis gel agarose.
E.DNA coli:
Tha 40 U de neach-dìon murine RNase air a sgrìonadh airson làthaireachd DNA genomic E. coli a’ cleachdadh TaqMan qPCR le primers sònraichte airson an locus rRNA E. coli 16S.Is e an truailleadh DNA genomic E. coli ≤ 0.1 pg/40 U.
Niths
1. Bidh oscillation no gluasad fòirneartach a’ leantainn gu neo-ghnìomhachd enzyme.
2.An raon teòthachd as fheàrr de seo bha an neach-dìon 25-55 ℃, agus chaidh a chuir an gnìomh aig 65 ℃ agus gu h-àrd.
3.Cha robh gnìomhachd RNase H, RNase 1 agus RNase T1 air am bacadh le neach-dìon murine RNase.
4.Chaidh casg air gnìomhachd RNase a lorg ann an raon farsaing de pH (bha pH 5-9 uile gnìomhach), agus chaidh an gnìomhachd as àirde fhaicinn aig pH 7-8.
5. Leis gu bheil ribonucleases mar as trice a’ cumail gnìomhachd fo chumhachan dì-nàdurrach, feumar a bhith faiceallach nach cuir thu às do mholacilean RNase Inhibitor a tha air iom-fhillte le ribonuclease.Gus casg a chuir air ribonuclease gnìomhach a leigeil ma sgaoil, bu chòir teòthachd nas àirde na 50 ° C agus dùmhlachd àrd de urea no riochdairean dì-nàdurrach eile a sheachnadh.
