Polymerase DNA Taq làidir

Tha Robustart Taq DNA Polymerase na polymerase DNA tòiseachaidh teth.Chan e a-mhàin gu bheil an toradh seo comasach air bacadh nas fheàrr a thoirt air an ath-bhualadh neo-shònraichte a dh’ adhbhraicheas annealing neo-shònraichte primers no cruinneachadh primer ann am pròiseas ullachadh agus leudachadh siostam PCR.Mar sin, tha sònraichteachd sàr-mhath aige agus tha e nas èifeachdaiche airson teamplaidean dùmhlachd ìosal a mheudachadh, agus tha e freagarrach airson freagairt leudachaidh PCR ioma-fhillte.A bharrachd air an sin, tha iomchaidheachd fìor mhath aig an toradh seo, agus gheibhear toraidhean leudachaidh seasmhach ann an diofar sheòrsaichean ath-bheachdan PCR.

Co-phàirtean

1.5 U/μL Robustart Taq DNA polymerase

2.10 × PCR Buffer II (Mg²+ an-asgaidh) (roghainneil)

3.25 mM MgCl₂(roghainneil)

* Chan eil dNTP agus Mg²+ ann an 10 × PCR Buffer II (Mg²+), feuch an cuir thu dNTPs agus MgCl₂nuair a bhios tu ag ullachadh an t-siostam freagairt.

Tagraidhean air am moladh

1.Meudachadh luath.

2.Meudachadh iomadach.

3.Meudachadh dìreach air fuil, swabs, agus sampallan eile.

4.A ‘lorg ghalaran analach.

Suidheachadh stòraidh

-20 ° C airson stòradh fad-ùine, bu chòir a mheasgachadh gu math mus tèid a chleachdadh, seachain reothadh tric.

* Ma thachras sileadh às deidh fuarachadh, tha e àbhaisteach;thathar a 'moladh a bhith a' cothromachadh teòthachd an t-seòmair mus tèid a mheasgachadh agus a chleachdadh.

Mìneachadh Aonad

Tha aon aonad gnìomhach (U) air a mhìneachadh mar an ìre de enzyme a tha a’ toirt a-steach 10 nmol de deoxyribonucleotide a-steach do stuth searbhagach-soluble aig 74 ° C airson 30mion a’ cleachdadh DNA sperm bradan gnìomhaichte mar theamplaid / primer.

Smachd Càileachd

1.Purity electrophoretic SDS-PAGE nas àirde na 98%.

2.Cugallachd leudachaidh, smachd baidse-gu-baidse, seasmhachd.

3.Gun ghnìomhachd nuclease exogenous, gun truailleadh endonuclease exogenous no exonuclease

Stiùiridhean

Suidheachadh freagairt

Notaichean:

1) a.Chan eil dNTP agus Mg²+ anns a’ bhufair, feuch an cuir thu dNTPs agus MgCl ris₂nuair a bhios tu ag ullachadh an t-siostam freagairt.

2) b.Ma thèid a chleachdadh airson qPCR / qRT-PCR, bu chòir probes flùraiseach a chur ris an t-siostam ath-bhualadh.Mar as trice, bheir dùmhlachd primer deireannach de 0.2 μM deagh thoraidhean;ma tha an coileanadh freagairt truagh, faodar an dùmhlachd primer atharrachadh anns an raon de 0.2-1 μM.Mar as trice tha an dùmhlachd probe air a mheudachadh anns an raon 0.1-0.3 μM.Faodar deuchainnean caisead dùmhlachd a dhèanamh gus am measgachadh as fheàrr de primer agus probe a lorg.

Pròtacal rothaireachd teirmeach

Notaichean

1.Cha bu chòir an ìre leudachaidh de DNA polymerase luath a bhith nas ìsle na 1 kb / 10 s.Tha an ìre àrdachadh is tuiteam teòthachd, modh smachd teothachd agus èifeachdas giùlan teas de dhiofar ionnstramaidean PCR ag atharrachadh gu mòr, agus mar sin thathas a’ moladh na suidheachaidhean freagairt as fheàrr a dhèanamh airson an ionnstramaid PCR luath sònraichte.

2.Tha an siostam gu math sùbailte, le sònrachas agus cugallachd nas àirde.

3.Freagarrach airson a chleachdadh mar ath-bheachdan lorg PCR le mothachadh àrd, agus faodar an cleachdadh ann an ath-bheachdan leudachaidh PCR ioma-fhillte.

4.5 ′ → 3 ′ gnìomhachd polymerase, gnìomhachd exonuclease 5 ′ → 3 ′;no gnìomhachd exonuclease 3′→5′;chan eil gnìomh dearbhaidh ann.

5.Freagarrach airson deuchainn càileachdail agus cainneachdail air PCR agus RT-PCR.

6.Is e deireadh 3 ′ toradh PCR A, a dh’ fhaodar a chlò-bhualadh gu dìreach ann an vectar T.

7.Tha an dòigh trì-cheum air a mholadh airson primers le teòthachd ìosal annealing no airson leudachadh air pìosan nas fhaide na 200 bp.