UNG mothachail air teòthachd
Tha UNG a tha mothachail air teòthachd (TS-UNG) air fhaighinn le abairt ath-chuingealaichte ann an E. coli.Bidh an enzyme a’ catalachadh leigeil ma sgaoil uracil an-asgaidh bho DNA aon-shreath agus dà-shreath anns a bheil uracil agus tha e neo-ghnìomhach an aghaidh RNA.An coimeas ris an enzyme àbhaisteach UNG de thùs gine E. coli, tha gnìomhachd nas àirde aig enzyme TS-UNG aig teòthachd ìosal (20 ℃ ~ 37 ℃) agus tha e mothachail air teòthachd agus furasta a chuir an gnìomh (50 ℃), a ’seachnadh truailleadh meudachaidh anns a bheil dUTP toraidhean aig teòthachd an t-seòmair leis a’ ghnìomhachd air fhàgail a dh’ fhaodadh fuireach às deidh an enzyme àbhaisteach UNG a chuir an gnìomh.Mar sin, chan e a-mhàin gu bheil enzyme TS-UNG freagarrach airson freagairt casg truailleadh PCR, ach tha e cuideachd a ’maidseadh gu math ris a’ phrògram leudachaidh RT-PCR agus faodar a chleachdadh ann an ath-bhualadh casg truailleadh RT-PCR.
Iarrtas air a mholadh
Meudachadh Casg Truailleadh
Suidheachadh stòraidh
-20 ° C airson stòradh fad-ùine, bu chòir a mheasgachadh gu math mus tèid a chleachdadh, seachain reothadh tric.
Bufair stòraidh
20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, Stabilizer, 50% Glycerol.
Mìneachadh Aonad
Is e an ìre de enzyme a dh’ fheumar gus 1µg de DNA aon-shreath anns a bheil bunaitean dU a lughdachadh ann an 1 uair aig 37 ° C aonad gnìomhachd 1 (U).
Smachd Càileachd
1.purrachd electrophoretic SDS-PAGE nas àirde na 98%
2.Gnìomh truaillidh, smachd batch-gu-batch, seasmhachd
3.Gun ghnìomhachd nuclease exogenous, gun truailleadh endonuclease exogenous no exonuclease.
Stiùiridhean
| Co-phàirtean | Meud (μL) | Co-chruinneachadh deireannach |
| Bufair 10 × PCR (dNTP an-asgaidh, Mg²+an-asgaidh) | 5 | 1 × |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (cuir an àite dTTP) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0.5 (0.1-0.5) | 0.5 U (0.1-0.5U) |
| 25 × Primer Mixa | 2 | 1 × |
| Teamplaid | - | ＜1μg/freagairt |
| dhH₂O | Gu 50 | - |
Nota: a: Ma thèid a chleachdadh airson qPCR / qRT-PCR, bu chòir an probe fluorescent a chuir a-steach don t-siostam ath-bhualadh.Mar as trice, faodaidh dùmhlachd primer deireannach de 0.2 μM deagh thoraidhean a thoirt seachad;nuair a tha coileanadh an ath-bhualadh truagh, faodar an dùmhlachd primer atharrachadh anns an raon de 0.2-1 μM.Mar as trice, tha an dùmhlachd probe air a mheudachadh anns an raon 0.1-0.3 μM.Faodar deuchainnean caisead dùmhlachd a dhèanamh gus am measgachadh as fheàrr de primer agus probe a lorg.
Notaichean
1.Tha an teòthachd ath-bhualadh as fheàrr de TS-UNG enzyme an ìre mhath ìosal, agus faodar a mheudachadh anns an raon de 20 ℃ ~ 37 ℃, faodar an dòs de enzyme agus an ùine ath-bhualadh a mheudachadh anns an raon de 0.1 ~ 0.5 U, 5 ~ 10 min;agus faodar an enzyme a chuir an gnìomh ann am pròiseas tar-sgrìobhaidh air ais.
2.Tha e freagarrach airson PCR agus RT-PCR gus casg a chuir air truailleadh.
3.Seachain reothadh-loisgte gu tric, agus na bi fosgailte do atharrachaidhean mòra ann an teòthachd.
4.Tha èifeachdas cleachdaidh eadar-dhealaichte aig diofar ghinean a thèid a mheudachadh de dUTP agus cugallachd ri enzyme UNG, mar sin, ma tha cleachdadh siostam UNG a’ leantainn gu lùghdachadh ann an cugallachd lorg, bu chòir an siostam ath-bhualadh atharrachadh agus ùrachadh, ma tha feum agad air taic theicnigeach, cuir fios gu ar companaidh.
