2 × Sensi Direct Premix-UNG (Probe qPCR)
Àireamh cat: HCB5151A
Tha SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) air a dhealbhadh gus PCR a dhèanamh gu dìreach bho shamhlaichean gun às-tharraing DNA no ullachadh sampall.Tha an reagent seo air a dhèanamh suas de DNA polymerase le toiseach tòiseachaidh, uracil DNA glycosylase (UNG), RNase Inhibitor, MgCl2, dNTPs (le dUTP an àite dTTP), agus stabilizers, airson PCR cainneachdail (qPCR).Bidh an ath-ghluasad seo a’ ro-chruthachadh fulangas àrd-dìon, agus mar sin faodar a chuir an sàs gu dìreach ann a bhith a’ lorg shampaill mar swab amhach, seile, fuil slàn an-aghaidh coagulated, plasma, agus serum às aonais às-tharraing DNA.Bidh an reagent a’ cleachdadh bufair seilbh airson qPCR le enzyman measgaichte de DNA polymerase anti-inhibitory agus enzyme UNG.Mar sin, faodaidh e leudachadh math fhaighinn air ginean targaid ann an sampallan anns a bheil luchd-dìon agus casg a chuir air leudachadh meallta dearbhach air adhbhrachadh le truailleadh PCR fuigheall agus aerosol.Tha an reagent seo co-chòrdail ris a’ mhòr-chuid de dh’ ionnstramaidean cainneachdail PCR, leithid Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche agus mar sin air adhart.
Co-phàirtean
1. 50 × SensiDirect Enzyme/UNG Mix
2. 2 × Bufair Premix SensiDirect (dUTP)
Suidheachadh stòraidh
Bu chòir na pàirtean uile a chumail aig -20 ℃ airson stòradh fad-ùine agus 4 ℃ airson suas ri 3 mìosan.Feuch an measgachadh thu gu mionaideach às deidh leaghadh agus centrifuge mus cleachd thu.Seachain reothadh tric.
Pròtacal Rothaireachd
| Ceum | Teòthachd | Uair | Rothaireachd |
| Cunnart | 50 ℃ | 2 mhionaid | 1 |
| Polymerase a chur an gnìomh | 95 ℃ | 1-5 mionaidean | 1 |
| Fiaclaireachd | 95 ℃ | 10-20an | 40-50 |
| Annealing/Leudachadh | 56-64 ℃ | 20-60an |
Stiùireadh pìobaireachd
| Ath-ghnìomhaiche | Meud per ath-bhualadh | Meud gach freagairt | Tùsachadh Deireannach |
| 2 × Bufair Premix SensiDirect (dUTP) | 12.5µL | 25µl | 1 × |
| 50 × SensiDirect Enzyme / UNG Mix | 0.5µL | 1µl | 1 × |
| 25 × Primer-Probe Mix1, 2 | 1µl | 2µL | 1 × |
| Sampall3, 4 | - | - | - |
| dhh2O | - | - | - |
| Meud iomlan | 25 μL | 50 μL | - |
1. Mar as trice is e 0.2μM an dùmhlachd deireannach de primer.Airson toraidhean nas fheàrr, faodar an dùmhlachd primer a mheudachadh taobh a-staigh raon 0.2-1μM.
2. San fharsaingeachd, faodar an dùmhlachd probe a mheudachadh taobh a-staigh raon 0.1-0.3μM.Tha an dùmhlachd as fheàrr den probe co-cheangailte ris an ionnstramaid leudachaidh PCR fìor-ùine, an seòrsa probe, agus an seòrsa stuth labeling fluorescent.Feuch an toir thu sùil air leabhar-làimhe an ionnstramaid no na riatanasan sònraichte airson gach probe fluorescent.
3. Tha diofar sheòrsaichean de shamhlaichean a 'toirt a-steach diofar sheòrsachan agus susbaint inhibitor agus àireamh lethbhreac de ghine targaid.Bu chòir beachdachadh air meud an t-sampall a rèir an fhìor staid.Dèan lagachadh den sampall le bhith a’ cur uisge gun nuclease no TE Buffer ris, ma tha sin riatanach.
4. Meud a thathar a 'moladh de shamhlaichean eadar-dhealaichte:
| Sampall | Meud airson aon 50 μL ath-bhualadh | As àirde co-mheas |
| Fuil slàn anticoagulated | 2.5 μL | 5% |
| Plasma | 15 μL | 30% |
| Sèum | 10 μL | 20% |
| Sguabadh na smugaid | 10 μL | 20% |
| seile | 10 μL | 20% |
Smachd Càileachd
1. Lorgaidh gnìomh: cugallachd, specificity agus repeatability de qPCR.
2. Gun ghnìomhachd nuclease exogenous: gun truailleadh endonuclease exogenous agus exonuclease.
Notaichean toraidh
1. Tha an toradh seo a 'cleachdadh seòrsa ùr de DNA polymerase teas-tòiseachaidh, a dh'fhaodar a chuir an gnìomh ann an 1-5 mionaidean. Leis gu bheil am bufair freagairt aige air a mheudachadh, tha e nas freagarraiche airson PCR cainneachdail fluorescence dùbailte no iomadach a' cleachdadh modh dearbhaidh.
2. Ma tha luach Rn an leudachaidh PCR ro ìosal no ma tha an leudachadh gu follaiseach air a bhacadh, le bhith a’ lughdachadh meud an t-sampall, a’ meudachadh meud freagairt no a’ lagachadh an t-sampall roimhe dh’ fhaodadh na toraidhean adhartachadh.
3. Bu chòir cruinneachadh fala, seile, urine, swab amhaich, msaa a bhith a 'leantainn nan slatan-tomhais clionaigeach, agus faodar sampall ùr a chleachdadh gus casg a chur air truailleadh searbhag niuclasach.
4. Leis gu bheil èifeachdas cleachdaidh eadar-dhealaichte aig diofar amplicons ri dUTP agus cugallachd ri UNG, bu chòir na h-ath-bheachdan a mheudachadh ma lùghdaicheas cugallachd lorg nuair a bhios iad a’ cleachdadh siostam UNG.Feuch an cuir thu fios thugainn airson taic theicnigeach ma tha feum air.
5. Gus nach tèid leudachadh air bathar PCR a ghiùlan thairis eadar ath-bheachdan aon-cheum, tha feum air raon deuchainneach sònraichte agus pìobaire airson leudachadh.Obraich le miotagan agus atharraich gu tric agus na fosgail an tiùb freagairt às deidh leudachadh PCR.
