Ioma-fhillte Aon Cheum RT-qPCR Premix-UNG
Àireamh cat: HCB5145A
Tha Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) na inneal PCR cainneachdail ioma-fhillte stèidhichte air RNA mar theamplaid.Ann am pròiseas an deuchainn, chaidh tar-sgrìobhadh cùil agus PCR cainneachdail a dhèanamh anns an aon phìob, a rinn an obair deuchainneach nas sìmplidhe agus a lughdaich cunnart truailleadh.Anns a’ phasgan seo, chaidh a’ chiad iallan cDNA a cho-chur gu h-èifeachdach le Reverse Transcriptase teas-dhìonach agus àrdachadh gu cainneachdail le HotStart Tag DNA Polymerase.Anns a’ mhòr-chuid tha bufair MP làn-leasaichte, measgachadh enzymes, msaa. Tha Mg anns an fhuasgladh bufair mu thràth2+agus dNTP.A bharrachd air an sin, thathas a’ cur ris na factaran a dh’ fhaodadh casg a chuir gu h-èifeachdach air leudachadh PCR neo-shònraichte agus èifeachdas leudachaidh ioma ath-bheachdan qPCR a leasachadh, a dh’ fhaodas dèanamh cinnteach à èifeachdas leudachaidh agus suas ri freagairt leudachaidh iomadach.Chaidh an siostam dUTP/UDG a chur ris gus casg a chuir gu h-èifeachdach air cunnart truailleadh aerosol.
Co-phàirtean
1. Bufair
2. Enzyme Mix
Sònrachadh
| Tòisich teth | Toiseach tòiseachaidh teth togte |
| Modh lorgaidh | Dearbhadh primer-probe |
| Modh PCR | Aon cheum RT-qPCR |
| Polymerase | Tha DNA polymerase ann |
| Seòrsa sampall | DNA |
Cumhachan stòraidh
Tha an toradh air a chuir air falbh le deigh thioram agus faodar a stòradh aig -25 ~ -15 ℃ airson 1 bliadhna.Bu chòir dha a sheachnadh tricreothadh-loisgte.Thathar a 'moladh a shàbhaladh fa leth.
Stiùiridhean
1.Freagairt Siostam
| Co-phàirtean | Meud (μL) | Tùsachadh Deireannach |
| 2 × Bufair BP | 12.5 | 1 × |
| Enzyme measgachadh | 1 | - |
| Measgachadh Primer/Probe (2.5 μM) | 3 | 0.3m |
| Teamplaid RNA | 1-10 | - |
| H2O saor an asgaidh | gu 25 | - |
Notaichean:
Dèan cinnteach gun dèan thu measgachadh math mus cleachd thu e, seachain cus builgeanan air adhbhrachadh le crathadh fòirneartach.
a.Co-chruinneachadh primer: measgachadh primer a’ toirt a-steach primer ioma-fhillte, a rèir an t-suidheachaidh is dòcha an dùmhlachd primer as fheàrr eadar 0.l agus 1.0μM.
b.Co-chruinneachadh probe: Measgachadh probe a’ toirt a-steach buidheann flùraiseach eadar-dhealachadh bileagan probe ioma-fhillte, a rèir an t-suidheachaidh is dòcha an dùmhlachd probe as fheàrr eadar 0.05 agus 0.5μM.
c.Lùghdachadh teamplaid: Tha qPCR gu math mothachail agus thathas a’ moladh an teamplaid a lagachadh.Tha an luach smachd Ct freagarrach eadar 20 agus 35.
d.Ullachadh an t-siostaim: Feuch an ullaich thu anns a’ bhòrd obrach ultra-ghlan, agus pìobaire agus tiùb freagairt às aonais fuigheall nuclease;thathar a 'moladh ceann a' ghunna a chleachdadh le eileamaid sìoltachain.Seachain tar-thruailleadh agus truailleadh aerosol.
2. Rothaireachd OptimizedPròtacal
| Rothaireachd ceum | Temp. | Uair | Rothaichean |
| Ath-sgrìobhadh air ais | 50 ℃a | 20 mionaid | 1 |
| Tòiseach-dì-nàdarachadh | 95 ℃ | 5 mionaidean | 1 |
| Freagairt leudachaidh | 95 ℃ | 15 diog |
40-45 |
| 60 ℃ b | 30 diog c |
Notaichean:
a.Ath-sgrìobhadh air ais: Faodaidh an teòthachd 42 ° C no 50 ° C a thaghadh.
b.Freagairt leudachaidh: Tha an teòthachd air atharrachadh a rèir luach Tm nan primers dealbhaichte.
c.Togail comharran fluorescence: Feuch an suidhich thu am modh deuchainneach a rèir riatanasan leabhar-làimhe an ionnstramaid.
Notaichean
Feuch an caith thu am PPE riatanach, leithid còta obair-lann agus miotagan, gus dèanamh cinnteach à do shlàinte is sàbhailteachd.
