Coitcheann SYBR GREEN qPCR Premix (gorm)

Cat Àireamh: HCB5041B

Tha Universal Blue qPCR Master Mix (Dath Stèidhichte) na ro-fhuasgladh airson leudachadh PCR cainneachdail 2 × fìor-ùine air a chomharrachadh le cugallachd àrd agus sònrachas, tha dath gorm ann, agus tha buaidh aige air lorg sampall a bharrachd.Bidh am prìomh phàirt Taq DNA polymerase a ’cleachdadh tòiseachadh teth antibody gus casg a chuir gu h-èifeachdach air leudachadh neo-shònraichte mar thoradh air annealing primer rè ullachadh sampall.Aig an aon àm, tha am foirmle a’ cur ris na factaran brosnachaidh gus èifeachdas leudachaidh freagairt PCR a leasachadh agus leudachadh ghinean le susbaint GC eadar-dhealaichte (30 ~ 70%) a chothromachadh, gus am faigh PCR cainneachdail deagh dhàimh sreathach ann an cainneachdail farsaing. sgìre.Anns an toradh seo tha ROX Passive Reference Dye, a tha iomchaidh don mhòr-chuid de ionnstramaidean qPCR.Chan eil e riatanach an dùmhlachd de ROX atharrachadh air diofar ionnstramaidean.Chan fheumar ach primers agus teamplaidean a chuir ris gus an siostam ath-bhualadh ullachadh airson leudachadh.

Co-phàirtean

Measgachadh maighstir qPCR uile-choitcheann gorm

Suidheachadh stòraidh

Tha an toradh air a chuir air falbh le pacaidean deigh agus faodar a stòradh aig -25 ℃ ~ -15 ℃ airson 18 mìosan.Feumar irradachadh solais làidir a sheachnadh nuair a bhios tu a’ stòradh no ag ullachadh an t-siostam freagairt.

Sònrachadh

Stiùiridhean

Siostam 1.Reaction

[Nòta]: Measgachadh gu mionaideach mus cleachd thu e gus cus builgeanan a sheachnadh bho chrathadh làidir.

a) Co-chruinneachadh primer: Is e an dùmhlachd primer mu dheireadh 0.2μmol / L, agus faodar cuideachd atharrachadh eadar 0.1 agus 1.0μmol / L mar a bhios iomchaidh.

b) Dùmhlachadh teamplaid: Ma tha an teamplaid na fhuasgladh stoc cDNA gun lagachadh, cha bu chòir an tomhas-lìonaidh a thathar a’ cleachdadh a bhith nas àirde na 1/10 de mheud iomlan an fhreagairt qPCR.

c) Lùghdachadh teamplaid: Thathas a’ moladh am fuasgladh stoc cDNA a lagachadh 5-10 tursan.Tha an ìre as fheàrr de theamplaid air a chur ris nas fheàrr nuair a tha an luach Ct a gheibhear le leudachadh 20-30 cearcall.

d) Siostam freagairt: Thathas a’ moladh 20μL no 50μL a chleachdadh gus dèanamh cinnteach à èifeachdas agus ath-aithris leudachadh gine targaid.

e) Ullachadh an t-siostaim: Feuch an ullaich thu anns a’ bheing fìor ghlan agus cleachd na molaidhean agus na tiùban freagairt às aonais fuigheall nuclease;thathas a’ moladh na molaidhean a chleachdadh le cartan sìoltachain.Seachain tar-thruailleadh agus truailleadh aerosol.

2.Prògram freagairt

Prògram àbhaisteach

Prògram luath

[Nòta]: Tha am prògram luath freagarrach airson a’ mhòr-chuid de ghinean, agus faodar prògraman àbhaisteach fheuchainn airson ginean structar àrd-sgoile iom-fhillte fa leth.

a) Teòthachd agus ùine annealing: Feuch an atharraich thu a rèir fad primer agus gine targaid.

b) Togail comharran fluorescence (★): Feuch an suidh thu am modh deuchainneach a rèir nan riatanasan anns an stiùireadh airson cleachdadh an ionnstramaid.

c) lùb leaghaidh: Faodar am prògram bunaiteach ionnstramaid a chleachdadh gu h-àbhaisteach.

3. Mion-sgrùdadh Toradh 

Bha feum air co-dhiù trì mac-samhail bith-eòlasach airson deuchainnean cainneachdail.Às deidh an ath-bhualadh, feumar an lùb leudachaidh agus an lùb leaghaidh a dhearbhadh.

3.1 lùb leudachaidh:

Tha an lùb leudachaidh àbhaisteach ann an cumadh S.Tha mion-sgrùdadh cainneachdail nas cinntiche nuair a thuiteas luach Ct eadar 20 agus 30. Ma tha luach Ct nas lugha na 10, feumar an teamplaid a lagachadh agus an deuchainn a dhèanamh a-rithist.Nuair a tha luach Ct eadar 30-35, feumar an dùmhlachd teamplaid no meud an t-siostam ath-bhualadh àrdachadh, gus èifeachdas leudachaidh a leasachadh agus dèanamh cinnteach à cruinneas mion-sgrùdadh toraidh.Nuair a tha luach Ct nas àirde na 35, chan urrainn do thoraidhean an deuchainn mion-sgrùdadh cainneachdail a dhèanamh air faireachdainn a’ ghine, ach faodar a chleachdadh airson mion-sgrùdadh càileachdail.

3.2 lùb leaghaidh:

Tha an aon stùc den lùb leaghaidh a’ nochdadh gu bheil sònrachas an ath-bhualadh math agus faodar mion-sgrùdadh cainneachdail a dhèanamh;ma tha an lùb leaghaidh a’ nochdadh stùcan dùbailte no iomadach, chan urrainnear mion-sgrùdadh cainneachdail a dhèanamh.Tha an lùb leaghaidh a’ nochdadh stùcan dùbailte, agus feumar breithneachadh a bheil an stùc neo-thargaid na primer dimer no leudachadh neo-shònraichte le electrophoresis gel DNA agarose.Mas e primer dimer a th ’ann, thathas a’ moladh an dùmhlachd primer a lughdachadh no primers ath-dhealbhadh le èifeachdas leudachaidh àrd.Mas e leudachadh neo-shònraichte a th’ ann, feuch an àrdaich thu an teòthachd annealing, no ath-dhealbhaich na primers gu sònraichte.

Notaichean

Feuch an cuir thu ort am PPE riatanach, a leithid de chòta obair-lann agus miotagan, gus dèanamh cinnteach à do shlàinte is sàbhailteachd！

Tha an toradh seo airson cleachdadh rannsachaidh A-MHÀIN！