Hotstart Taq DNA Polymerase
Tha Hot Start Taq DNA Polymerase (atharrachadh antibody) na polymerase DNA thermostable le tòiseachadh teth bho Thermus aquaticus YT-1, aig a bheil gnìomhachd polymerase 5 ′ → 3 ′ agus gnìomhachd endonuclease flap 5 ’.Is e polymerase Taq DNA a th’ ann an toiseach teth Taq DNA polymerase a chaidh atharrachadh le antibodies thermoabile Taq.Mheudaich atharrachadh antibody sònraichteachd, cugallachd, agus toradh PCR.
Co-phàirtean
| Comh-phàirt | HC1012a-01 | HC1012a-02 | HC1012a-03 | HC1012a-04 |
| Bufair Taq 5 × HC | 4 × 1 mL | 4 × 10 mL | 4 × 50 mL | 5 × 400 mL |
| Hot Start Taq DNA Polymerase (antibody atharraichte) (5 U / μL) | 0.1 ml | 1 ml | 5 ml | 10 × 5 mL |
Iarrtasan
10 mM Tris-HCl (pH 7.4 aig 25 ℃), 100 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM dithiothreitol, 0.5% Tween20, 0.5% IGEPALCA-630 agus 50% Glycerol.
Suidheachadh stòraidh
Còmhdhail fo 0 ° C agus a bhith air a stòradh aig -25 ° C ~ -15 ° C.
Mìneachadh Aonad
Tha aon aonad air a mhìneachadh mar an ìre de enzyme a tha a’ toirt a-steach 15 nmol de dNTP a-steach do stuth searbhagach do-fhuasgladh ann an 30 mionaid aig 75 ° C.
Smachd Càileachd
1.EndGnìomhachd onuclease:Mar thoradh air goir 20 U de enzyme le 4 μg pUC19 DNA airson 4 uairean aig 37 ℃ cha robh truailleadh sam bith air an DNA mar a chaidh a dhearbhadh le electrophoresis gel.
2.5 kb Lambda PCR:Bidh 25 cearcallan de leudachadh PCR de 5 ng Lambda DNA le 1.25 aonad de Taq DNA Polymerase an làthair 200 µM dNTPs agus 0.2 µM primers a’ leantainn gu toradh 5 kb ris a bheil dùil.
3.Gnìomh exonuclease:Le bhith a’ toirt a-steach freagairt 50 µl anns a bheil co-dhiù 12.5 U de Taq DNA Polymerase le 10 nmol 5’-FAM oligonucleotide airson 30 mionaid aig 37 ℃ chan eil sin a’ toirt a-mach truailleadh sam bith a lorgar.
4.Gnìomhachd RNase:Mar thoradh air a bhith a’ toirt a-steach freagairt 10 µL anns a bheil 20 U de enzyme le 1μg de ath-sgrìobhaidhean RNA airson 2 uair aig 37 ° C cha robh truailleadh sam bith air an RNA mar a chaidh a dhearbhadh le electrophoresis gel.
5.Neo-ghnìomhachd teas:Chan eil.
Siostam freagairt
| Co-phàirtean | Toirt |
| DNA teamplaida | roghainneil |
| 10 μM air adhart Primer | 0.5 μL |
| 10 μM Reverse Primer | 0.5 μL |
| dNTP Mix (10mM gach) | 0.5 μL |
| Bufair Taq 5 × HC | 5 μL |
| Tha DNA polymerase annb(5U/μL) | 0.125 μL |
| Uisge gun niuclas | Suas gu 25 μL |
Notaichean:
1) a.
| DNA | Suim |
| Genomic | 1 ng-1 μg |
| Plasmid no bhìorasach | 1 dg-1 ng |
2) b.Faodaidh an dùmhlachd as fheàrr de Taq DNA Polymerase a bhith eadar 5-50 aonad / mL (0.1-0.5 aonad / freagairt 25 µL) ann an tagraidhean sònraichte.
Pròtacal rothaireachd teirmeach
PCR
| Ceum | Teòthachd(°C) | Uair | Rothaichean |
| Dì-nàdarachadh tùsaila | 95 ℃ | 1-3 mionaidean | - |
| Dì-nàdarachadh | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 cuairtean |
| Annealingb | 45-68 ℃ | 15-60 s | |
| Leudachadh | 68 ℃ | 1kb/mion | |
| Leudachadh Deireannach | 68 ℃ | 5 mionaidean | - |
Notaichean:
1) Tha dì-nàdarachadh tùsail de 1 min aig 95 ° C gu leòr airson a’ mhòr-chuid de leudachaidhean.Airson teamplaidean duilich, thathas a’ moladh dì-nàdurachadh nas fhaide de 2-3mins aig 95 ° C.Le coloinidh PCR, thathas a’ moladh dì-nàdarachadh tùsail 5 mionaidean aig 95 ° C.
2) Tha an ceum annealing mar as trice 15-60 s.Tha an teòthachd annealing stèidhichte air Tm na paidhir primer agus mar as trice tha e 45-68 ℃.
