Ioma-fhillte qPCR Probe Premix
Àireamh cat: HCB5051A
Tha TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Dath Stèidhichte) na ro-fhuasgladh airson leudachadh PCR cainneachdail 2 × fìor-ùine air a chomharrachadh le cugallachd àrd agus sònrachas, a tha gorm ann an dath, agus aig a bheil buaidh air sampall a bharrachd.Tha an toradh seo na imoibrí ro-mheasgaichte 2 × Mix a bheir comas do suas ri ceithir ath-bheachdan cainneachdail PCR ann an aon fhreagairt gu math.Tha an toradh seo a’ toirt a-steach an dòigh antibody a chaidh atharrachadh gu ginteil gu enzyme Taq tòiseachaidh teth, ag adhartachadh gu mòr cugallachd leudachaidh agus sònrachas.Aig an aon àm, tha an toradh seo air am bufair ioma-fhreagairt a bharrachadh gu mòr, a dh’ fhaodadh èifeachdas leudachaidh an ath-bhualadh adhartachadh agus àrdachadh èifeachdach de theamplaidean dùmhlachd ìosal adhartachadh.Faodar an toradh seo a chleachdadh airson genotyping agus mion-sgrùdadh cainneachdail ioma-fhillte.
Sònrachadh
| Tòisich teth | Toiseach tòiseachaidh teth togte |
| Modh lorgaidh | Dearbhadh primer-probe |
| Modh PCR | qPCR |
| Polymerase | Tha DNA polymerase ann |
| Seòrsa sampall | DNA |
Cumhachan stòraidh
Tha an toradh air a chuir air falbh le deigh thioram agus faodar a stòradh aig -25 ~ -15 ℃ airson 2 bhliadhna.
Stiùiridhean
1. ReachdSiostam
| Co-phàirtean | Meud (μL) | Tùsachadh Deireannach |
| 2 × TaqMan multiplex qPCR Master Mix | 12.5 | 1 × |
| measgachadh primer (10 μmol / l) a | × | 0.1 - 0.5 μmol/L |
| measgachadh probe (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/L |
| Rox iomradh dath | 0.5 | 1 × |
| Teamplaid DNA/cDNA | 1-10 | - |
| dhh2O | suas ri 25 | - |
Notaichean:Measgachadh gu mionaideach mus cleachd thu gus cus builgeanan a sheachnadh bho chrathadh làidir.
a.Co-chruinneachadh primer: Tha grunn phaidhrichean de primers ann am Primer Mix, mar as trice gach primer aig dùmhlachd deireannach de 0.2 μmol/L agus faodar cuideachd atharrachadh eadar 0.1 agus 0.5 μmol/L mar a bhios iomchaidh.
b.Dùmhlachd probe: Tha grunn probes ann an Probe Mix le comharran flùraiseach eadar-dhealaichte, agus faodar dùmhlachd gach probe atharrachadh eadar 50 agus 250 nmol / L a rèir suidheachadh sònraichte.
1.Iomradh dath Rox: Tha e air a chleachdadh air inneal leudachaidh PCR Real Time leithid Applied Biosystems gus mearachd comharra flùraiseachd a chaidh a chruthachadh eadar tobraichean a cheartachadh;chan eil iomradh dath Rox anns an toradh seo.Thathas a’ moladh Cas # 10200 ma tha feum air.
2.Lùghdachadh teamplaid: Tha qPCR gu math mothachail, agus thathas a’ moladh an teamplaid a lagachadh airson a chleachdadh.Mas e fuasgladh stoc cDNA a th’ anns an teamplaid, cha bu chòir meud an teamplaid a bhith nas àirde na 1/10 den tomhas-lìonaidh iomlan.
3.Siostam ath-bhualadh: Thathas a’ moladh 25μL, 30μL no 50 μL gus dèanamh cinnteach à èifeachdas agus ath-aithris leudachadh gine targaid.
4.Ullachadh an t-siostaim: Feuch an ullaich thu anns a ’bheing fìor ghlan, agus cleachd na molaidhean agus na tiùban freagairt às aonais fuigheall nuclease;thathas a’ moladh na molaidhean a chleachdadh le cartan sìoltachain.Seachain tar-thruailleadh agus truailleadh aerosol.
2.Prògram freagairt
| Ceum rothaireachd | Temp. | Uair | Rothaichean |
| Tòiseach-dì-nàdarachadh | 95 ℃ | 5 mionaidean | 1 |
| Dì-nàdarachadh | 95 ℃ | 15 diog | 45 |
| Annealing/Leudachadh | 60 ℃ | 30 diog |
Notaichean:
1.Annealing / leudachadh: Faodar an teòthachd agus an ùine atharrachadh gu h-iomchaidh a rèir an luach Tm primer dealbhaichte.
2.Togail comharran fluorescence: Tha an ùine togail chomharran fluorescence a dh ’fheumar airson diofar ionnstramaidean lorg qPCR eadar-dhealaichte, feuch an cuir thu a-steach a rèir na h-ùine as ìsle.Tha ùine grunn ionnstramaidean cumanta air a shuidheachadh mar a leanas:
20 diog: Biosystems Gnìomhaichte 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 diog: Bith-shiostaman Gnìomhaichte 7300
32 diog: Biosystems Gnìomhaichte 7500
Notaichean
Feuch an cuir thu ort am PPE riatanach, a leithid de chòta obair-lann agus miotagan, gus do shlàinte is do shàbhailteachd a dhèanamh cinnteach!
