Superstart qPCR Premix plus-UNG
Àireamh Cat: HCB5071E
Tha Superstart qPCR Premix plus-UNG na inneal sònraichte a chaidh a dhealbhadh airson ath-bheachdan càileachdail agus cainneachdail PCR Real Time a’ cleachdadh lorg stèidhichte air probe, air a leasachadh gu sònraichte airson pròiseasan lyophilization.Tha einnsear tòiseachaidh teth ùr ann Hotstart Taq plus (DG), aig a bheil gnìomhachd enzyme Taq air a seuladh aig teòthachd an t-seòmair, gu h-èifeachdach a’ cur bacadh air leudachadh neo-shònraichte air adhbhrachadh le annealing neo-shònraichte primer no cruthachadh primer dimer fo chumhachan teòthachd ìosal, agus mar sin a’ leasachadh sònrachas an fhreagairt leudachaidh.Bidh an ath-ghnìomhaiche seo a’ cleachdadh bufair sònraichte qPCR leasaichte agus siostam an-aghaidh truailleadh UNG/dUTP gus tòiseachadh teth luath a choileanadh, a’ leasachadh gu mòr èifeachdas agus cugallachd ath-bheachdan qPCR.Faodaidh e lùban àbhaisteach math fhaighinn ann an raon farsaing de raointean cainneachdail agus tomhas a dhèanamh gu ceart, gu h-èifeachdach a’ cur casg air àrdachadh meallta meallta air adhbhrachadh le toraidhean PCR air fhàgail no truailleadh aerosol.Tha an reagent seo co-chòrdail ris a’ mhòr-chuid de dh’ ionnstramaidean cainneachdail PCR bho luchd-saothrachaidh leithid Applied Biosystems, Eppendorf, Bio- Rad agus Roche msaa, agus a’ taisbeanadh deagh sheasmhachd ann an cruth lyophilized.
Co-dhèanamh an reactar
1. 5 × HotstartPremix plus-UNG (Mg2+an-asgaidh) (DG)
2. 250 mM MgCl2
3. 4 × lyoprotectant (roghainneil)
Cumhachan stòraidh
Stòradh fad-ùine aig -20 ℃;faodar a stòradh aig 4 ℃ airson suas ri 3 mìosan.Measgachadh gu math mus cleachd thu agusseachain reothadh is leaghadh a-rithist.
Pròtacal Rothaireachd
| Modh-obrach | Temp. | Uair | Rothaireachd |
| Cunnart | 50 ℃ | 2 min | 1 |
| Polymerase a chur an gnìomh | 95 ℃ | 1 ~ 5 mionaidean | 1 |
| Fiaclaireachd | 95 ℃ | 10 ~ 20 diog | 40-50 |
| Annealing agus leudachadh | 56 ~ 64 ℃ | 20 ~ 60 diog | 40-50 |
qPCR Liquid Reaction SyUllachadh gas
|
Cumadh |
Meud 25µL |
Meud 50µL |
Tùsachadh Deireannach |
| 5 × HotstartPremix plus-UNG(Mg2+an-asgaidh) (DG) | 5µl | 10µl | 1 × |
| 250mM mgCl2 | 0.45µL | 0.9µL | 4.5 mM |
| 4 × lyoprotectant1 | 6.25µL | 12.5µL | 1 × |
| 25 × Primer-Probe Mix2 | 1µl | 2µL | 1 × |
| DNA teamplaid3 | -- | -- | -- |
| dhh2O | Gu 25µL | Suas gu 50µL | -- |
1. Mar as trice bidh co-chruinneachadh deireannach de 0.2μM airson primers a 'toirt deagh thoraidhean;nuair a tha coileanadh freagairt truagh, atharraich dùmhlachd primer taobh a-staigh raon 0.2-1μM mar a dh’ fheumar.Mar as trice tha dùmhlachd probe air a mheudachadh taobh a-staigh raon 0.1-0.3μM tro dheuchainnean caisead gus na cothlamadh as fheàrr a lorg.
2. Tha an àireamh leth-bhreac de ghinean targaid a tha ann an diofar sheòrsaichean teamplaidean ag atharrachadh;ma tha sin riatanach, faodar caolachadh caisead a dhèanamh gus faighinn a-mach dè an ìre cur-ris teamplaid as fheàrr.
3. Faodar an siostam seo a lyophilized;nuair a bhios luchd-ceannach a’ cleachdadh an t-siostam seo às aonais riatanasan reothadh-tiormachaidh, faodar 4 × lyoprotectant a chur ris gu roghnach; ma tha feum air toraidhean air an tiormachadh le reothadh, rè dearbhadh coileanadh toraidh ìre ath-bheachdan leaghaidh, feumaidh e 4 × lyoprotectant a chuir ris gus dèanamh cinnteach à cunbhalachd le co-phàirtean siostam lyophilized agus buaidhean.
Nuair a bhios an siostam ga chleachdadhd airson reothadh-tiormachadh, ullaich an siostam as a leanas:
| Cumadh | 25µL Siostam freagairt |
| 5 × HotstartPremix plus-UNG (Mg2+an-asgaidh) (DG) | 5µl |
| 250mM mgCl2 | 0.45µL |
| 4 × lyoprotectant | 6.25µL |
| 25 × Primer-Probe Mix | 1µl |
| dhh2O | Gu 18 ~ 20µL |
* Ma tha feum air siostaman eile airson reothadh-tiormachadh, feuch an cuir thu fios air leth.
Pròiseas Lyophilizationss
| Modh-obrach | Temp. | Uair | Staid | Brùthadh |
| Ro-reothadh | 4 ℃ | 30 mionaid | Cùm |
1 aig |
| -50 ℃ | 60 mionaid | Fuarachadh | ||
| -50 ℃ | 180 mionaid | Cùm | ||
| A 'tiormachadh bun-sgoile | -30 ℃ | 60 mionaid | Teasachadh |
Vacuum deireannach |
| -30 ℃ | 70 mionaid | Cùm | ||
| A 'tiormachadh àrd-sgoile | 25 ℃ | 60 mionaid | Teasachadh |
Vacuum deireannach |
| 25 ℃ | 300 mionaid | Cùm |
2. Tha am pròiseas lyophilization gu h-àrd airson iomradh a-mhàin.Tha crìochan eadar-dhealaichte aig diofar sheòrsaichean toraidh agus diofar thiormairean reòta, agus mar sin faodar atharrachaidhean a dhèanamh a rèir an fhìorsuidheachaidhean rè cleachdadh.
3. Faodaidh diofar phròiseasan lyophilization a bhith freagarrach airson diofar mheudan baidse de lyophilizedtoraidhean, agus mar sin feumar dearbhadh deuchainn gu leòr a dhèanamh nuair a thèid a chleachdadh airson cinneasachadh mòr.
Stiùireadh airson a bhith a 'cleachdadh lyophilized fùdar
1. Goirid centrifuge an lyophilized pùdar;
2. Cuir teamplaid searbhag niuclasach ris a’ phùdar lyophilized agus cuir uisge suas gu 25µL;
3. Measgachadh gu math le centrifugation agus a 'ruith air inneal.
Smachd càileachd:
1. Deuchainn gnìomh: cugallachd, sònrachas, ath-riochdachadh qPCR.
2. Gun ghnìomhachd nuclease exogenous, gun truailleadh endo/exonuclease exogenous.
Fiosrachadh Teicnigeach:
1. Bidh Superstart qPCR Premix plus-UNG a' cleachdadh einnsean tòiseachaidh teth ùr a leigeas le tòiseachadh teth luath taobh a-staigh 1 ~ 5 mionaidean;tro bhith a’ cruthachadh bufair sònraichte tha e freagarrach airson ath-bheachdan cainneachdail PCR ioma-fhillte.
2. Tha sònrachas nas àirde aige a tha gu mòr a’ leasachadh cugallachd lorgadh cuibhreachaidh PCR cainneachdail fluorescence, a’ dèanamh àbhaisteachadh lùban leudachaidh, luach fluorescence a’ faighinn leasachadh follaiseach aig teamplaidean dùmhlachd ìosal, freagarrach mar ath-bheachdan lorgaidh cainneachdail PCR fluorescence.
3. Airson primers le teòthachd annealing nas ìsle no nas fhaide na pìosan 200bp, thathar a 'moladh modh 3-ceum.
4. Tha èifeachdas cleachdaidh dUTP agus cugallachd ri enzyme UNG eadar-dhealaichte airson diofar ghinean targaid, mar sin ma tha cleachdadh siostam UNG a 'leantainn gu lùghdachadh ann an cugallachd lorg, bu chòir an siostam ath-fhreagairt atharrachadh agus a mheudachadh.Ma tha feum air taic theicnigeach cuir fios chun chompanaidh againn.
5. Cleachd raointean sònraichte agus pìoban ro agus às deidh leudachadh, caith miotagan fhad ‘s a bhios tu ag obair agus cuir an àite iad gu tric;na fosgail an tiùb freagairt às deidh crìoch a chuir air PCR gus truailleadh sampaill le toraidhean PCR a lughdachadh.
