Glycosylase DNA Uracil
Tha Uracil-DNA Glycosylase (UNG no UDG) na clon ath-chuingealaichte de E.coli le cuideam moileciuil de 25 kDa.Bidh e a’ catalachadh leigeil ma sgaoil uracil an-asgaidh bho DNA aon-shreath agus dà-shreath anns a bheil uracil, agus tha e neo-ghnìomhach an aghaidh RNA, agus faodar a chleachdadh gus casg a chuir air truailleadh thoraidhean leudachaidh PCR.Tha am prionnsapal gnìomh stèidhichte air an fhìrinn ma thèid dUTP a chuir an àite dTTP anns an ath-bhualadh PCR agus toradh leudachaidh PCR anns a bheil bunaitean dU air a chruthachadh, faodaidh an enzyme an ceangal glycosidic de bhunaitean U a bhriseadh gu roghnach ann an sreath singilte agus dà-shreath. DNA agus a’ lughdachadh toradh leudachaidh PCR.
Iarrtas air a mholadh
Meudachadh Casg Truailleadh
Suidheachadh stòraidh
-20 ° C airson stòradh fad-ùine, bu chòir a mheasgachadh gu math mus tèid a chleachdadh, seachain reothadh tric.
Bufair stòraidh
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, Stabilizer, 50% glycerol.
Mìneachadh Aonad
Is e 1 aonad an ìre de enzyme a dh’ fheumar gus 1µg de DNA aon-shreath anns a bheil bunaitean dU a dhì-mhilleadh ann an 1 uair aig 37 ° C.
Smachd Càileachd
1.purrachd electrophoretic SDS-PAGE nas àirde na 98%
2.Cugallachd leudachaidh, smachd baidse-gu-baidse, seasmhachd
3.Às deidh 1U de UNG a làimhseachadh aig 50 ℃ airson 2 mhionaid, bu chòir an teamplaid anns a bheil U fo 103 leth-bhreac a bhith air a lughdachadh gu tur agus chan urrainnear toradh leudachaidh a thoirt gu buil
4.Chan eil gnìomhachd nuclease exogenous ann
Stiùiridhean
| Co-phàirtean | Meud (μL) | Co-chruinneachadh deireannach |
| Bufair 10 × PCR (dNTP an-asgaidh, Mg²+an-asgaidh) | 5 | 1 × |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (cuir an àite dTTP) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 U |
| 5 U/μL UNG | 0.25 (0.1-0.5) | 0.25 U (0.1-0.5) |
| 25 × Primer Mixa | 2 | 1 × |
| Teamplaid | - | ＜1μg/freagairt |
| dhH₂O | Gu 50 | - |
Thoir an aire: a: Ma thèid a chleachdadh airson qPCR / qRT-PCR, bu chòir an probe fluorescent a chuir a-steach don t-siostam ath-bhualadh.Mar as trice, faodaidh dùmhlachd primer deireannach de 0.2 μM deagh thoraidhean a thoirt seachad;nuair a tha coileanadh an ath-bhualadh truagh, faodar an dùmhlachd primer atharrachadh anns an raon de 0.2-1 μM.Mar as trice, tha an dùmhlachd probe air a mheudachadh anns an raon 0.1-0.3 μM.Faodar deuchainnean caisead dùmhlachd a dhèanamh gus am measgachadh as fheàrr de primer agus probe a lorg.
Notaichean
1.Faodar enzyme UNG a chleachdadh gus na toraidhean leudachaidh dUTP truaillidh a thoirt air falbh bhon t-siostam ath-bhualadh ron ath-bhualadh leudachaidh PCR, an uairsin gus toraidhean meallta-dearbhach a sheachnadh mar thoradh air truailleadh toraidh.
2.Is e an teòthachd as fheàrr airson enzyme UNG a thèid a chleachdadh anns an ath-bhualadh PCR an-aghaidh truailleadh 50 ℃ airson 2 mhionaid;is e an suidheachadh neo-ghnìomhachd 95 ℃ airson 5 mionaidean.
3.Seachain reothadh-loisgte gu tric, agus na bi fosgailte do atharrachaidhean mòra ann an teòthachd.
4.Tha èifeachdas cleachdaidh eadar-dhealaichte aig diofar ghinean a thèid a mheudachadh de dUTP agus cugallachd ri enzyme UNG, mar sin, ma tha cleachdadh siostam UNG a’ leantainn gu lùghdachadh ann an cugallachd lorg, bu chòir an siostam ath-bhualadh atharrachadh agus ùrachadh, ma tha feum agad air taic theicnigeach, cuir fios gu ar companaidh.
