Fiadhaich Taq DNA polymerase
Tha Taq DNA Polymerase na polymerase DNA thermostable bho Thermus aquaticus YT-1, aig a bheil gnìomhachd polymerase 5 ′ → 3 ′ agus gnìomhachd endonuclease flap 5 ’.
Co-phàirtean
| Comh-phàirt | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10 × Bufair Taq | 2 × 1 mL | 2 × 10 mL | 2 × 50 mL | 5 × 200 mL |
| DNA Polymerase (5 U/μL) | 0.1 ml | 1 ml | 5 ml | 5 × 10 mL |
Suidheachadh stòraidh
Còmhdhail fo 0 ° C agus a bhith air a stòradh aig -25 ° C ~ -15 ° C.
Mìneachadh Aonad
Tha aon aonad air a mhìneachadh mar an ìre de enzyme a tha a’ toirt a-steach 15 nmol de dNTP a-steach do stuth searbhagach do-fhuasgladh ann an 30 mionaid aig 75 ° C.
Smachd Càileachd
1.Measadh Purity Protein (SDS-PAGE):Bha purrachd Taq DNA polymerase ≥95% air a dhearbhadh le mion-sgrùdadh SDS-PAGE.
2.EndGnìomhachd onuclease:Tha co-dhiù 5 U de Taq DNA polymerase le 1 μg λDNA airson 16 uairean aig 37 ℃ a’ ciallachadh nach eil truailleadh sam bith ann mar a chaidh a dhearbhadh.
3.Gnìomh exonuclease:Tha co-dhiù 5 U de Taq DNA polymerase le 1 μg λ -Hind Ⅲ cnàmhadh DNA airson 16 uairean aig 37 ℃ a’ ciallachadh nach eil truailleadh sam bith ann mar a chaidh a dhearbhadh.
4.Gnìomhachd Nickase:Bidh co-dhiù 5 U de Taq DNA polymerase le 1 μg pBR322 DNA airson 16 uairean aig 37 ° C a’ leantainn gu truailleadh sam bith mar a chaidh a dhearbhadh.
5.Gnìomhachd RNase:Bidh co-dhiù 5 U de Taq DNA polymerase le 1.6 μg MS2 RNA airson 16 uairean aig 37 ° C a’ ciallachadh nach eil truailleadh sam bith ann mar a chaidh a dhearbhadh.
6.E. coliDNA:Tha 5 U de Taq DNA polymerase air a sgrìobadh airson làthaireachd DNA genomic E. coli a’ cleachdadh TaqMan qPCR le primers sònraichte airson an locus rRNA E. coli 16S.Is e an truailleadh DNA genomic E. coli ≤1 Leth-bhreac.
7.Meudachadh PCR (5.0 kb Lambda DNA)- Bidh freagairt 50 µL anns a bheil 5 ng Lambda DNA le 5 aonadan de Taq DNA Polymerase airson 25 cearcall de leudachadh PCR a’ leantainn gu toradh 5.0 kb ris a bheil dùil.
Suidheachadh freagairt
| Co-phàirtean | Toirt |
| DNA teamplaida | roghainneil |
| 10 μM air adhart Primer | 1 µL |
| 10 μM Reverse Primer | 1 µL |
| dNTP Mix (10mM gach) | 1 µL |
| 10 × Bufair Taq | 5 μL |
| Tha DNA polymerase annb | 0.25 μL |
| Uisge gun niuclas | Suas gu 50 μL |
Notaichean:
1) Tha an dùmhlachd freagairt as fheàrr de dhiofar theamplaidean eadar-dhealaichte.Tha an clàr a leanas a’ sealltainn an cleachdadh teamplaid a thathar a’ moladh airson siostam freagairt 50 µL.
| DNA | Suim |
| Genomic | 1 ng-1 μg |
| Plasmid no bhìorasach | 1 dg-1 ng |
2) Faodaidh an dùmhlachd as fheàrr de Taq DNA Polymerase a bhith eadar 0.25 µL ~ 1 µL ann an tagraidhean sònraichte.
FreagairtPrògram
| Ceum | Teòthachd(°C) | Uair | Rothaichean |
| Dì-nàdarachadh tùsaila | 95 ℃ | 5 mionaidean | - |
| Dì-nàdarachadh | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 cuairtean |
| Annealingb | 60 ℃ | 15 s | |
| Leudachadh | 72 ℃ | 1kb/mion | |
| Leudachadh Deireannach | 72 ℃ | 5 mionaidean | - |
Notaichean:
1) Tha a’ chiad staid dì-nàdurachaidh freagarrach airson a’ mhòr-chuid de ath-bheachdan leudachaidh agus faodar atharrachadh a rèir iom-fhillteachd structar teamplaid.Ma tha structar an teamplaid iom-fhillte, faodar an ùine ro-dhìolaidh a leudachadh gu 5 - 10 mionaidean gus a’ chiad bhuaidh dì-nàdurachaidh a leasachadh.
2) Feumaidh an teòthachd annealing a bhith air atharrachadh a rèir luach Tm an primer, a tha mar as trice air a shuidheachadh gu 3 ~ 5 ℃ nas ìsle na luach Tm an primer;Airson teamplaidean iom-fhillte, feumar teòthachd analachaidh atharrachadh agus ùine leudachaidh a leudachadh gus leudachadh èifeachdach a choileanadh.
